DB13T 2609-2017 禽流感病毒与新城疫病毒二重RT-PCR检测方法

DB13/T 2609-2017是河北省地方标准，规定了禽流感病毒和新城疫病毒的二重RT-PCR检测方法。以下是对该标准中关键条款的详细解读。

首先，标准明确了适用范围：适用于禽类样品中禽流感病毒H5亚型和新城疫病毒的检测。这表明该方法主要针对特定类型的病毒检测，而非所有禽病病毒。

在试剂准备部分，标准要求使用特异性引物和探针，并且需经过严格的实验验证。例如，引物的设计应确保与目标基因序列高度匹配，避免非特异性扩增。此外，还应配制好各种反应液，并做好阳性对照、阴性对照以及空白对照的准备。

关于样本采集，标准指出应从健康状况异常的禽只或群体中采集样本，包括泄殖腔拭子、咽喉拭子等。样本采集后需立即放入含有RNA稳定剂的保存液中，并尽快送检。如果不能及时检测，则需将样本置于-70℃条件下长期保存。

对于RT-PCR反应条件，标准给出了详细的步骤。如逆转录温度为42℃持续60分钟，预变性95℃持续10分钟，之后进行40个循环的变性退火延伸。每个循环的具体时间为变性95℃15秒，退火60℃30秒，延伸72℃30秒。

结果判定依据标准中的阈值设定。Ct值小于设定阈值时判为阳性，大于阈值且无扩增曲线时判为阴性。当出现灰区（介于阈值上下限之间）时，需要重复试验或采用其他方法进一步确认。

最后，标准强调了实验室质量控制的重要性。要求定期对仪器设备进行校准维护，同时操作人员需经过专业培训并持证上岗。检测记录要完整保存至少两年以上，以便追溯核查。

通过以上解读可以看出，DB13/T 2609-2017标准从样本采集到结果判定都制定了严格的操作规范，目的是保证检测结果的准确性和可靠性。这对于有效防控禽流感和新城疫具有重要意义。