DB22T 2628-2017 鹅细小病毒检测 聚合酶链式反应（PCR）法

摘要：本文件规定了鹅细小病毒检测的聚合酶链式反应（PCR）方法的技术要求、操作步骤和结果判定。本文件适用于鹅细小病毒的实验室检测与诊断。
Title：Detection of Goose Parvovirus - Polymerase Chain Reaction (PCR) Method
中国标准分类号：B46
国际标准分类号：11.220

DB22/T 2628-2017 是吉林省地方标准，规定了利用聚合酶链式反应（PCR）技术检测鹅细小病毒的方法。以下是对该标准中一些关键条文的详细解读：

### 样品采集与处理

标准要求样品应从疑似感染鹅的肝脏、脾脏或肠道内容物中采集。采集后的样品需立即置于无菌容器内，并尽快送至实验室进行检测。如果不能及时检测，样品应在-70℃条件下保存。这一规定确保了样本的新鲜度和完整性，避免因储存不当导致检测结果不准确。

### 核酸提取

核酸提取是PCR检测的关键步骤之一。标准指出，应使用商品化的DNA提取试剂盒来提取样品中的病毒DNA。操作过程中需严格遵守试剂盒说明书的要求，以保证提取效率和纯度。高质量的核酸提取能够提高后续扩增反应的成功率。

### 引物设计与选择

标准强调了引物设计的重要性，要求引物序列特异性高，能够特异性识别鹅细小病毒基因组上的特定区域。此外，引物长度一般为18-25个碱基，GC含量控制在40%-60%之间，熔解温度（Tm值）在55-65℃范围内。合理的引物设计可以有效避免非特异性扩增，提高检测灵敏度。

### PCR反应体系及条件

标准明确了PCR反应体系的组成成分及其用量，包括模板DNA、上下游引物、dNTPs、Mg²⁺以及热启动DNA聚合酶等。同时规定了PCR反应的退火温度通常设定在55-60℃之间，延伸时间为30秒至1分钟，循环次数为35-40次。这些参数的选择基于大量实验数据，旨在获得最佳的扩增效果。

### 结果判定

根据标准，若扩增产物出现预期大小的目标片段，则判断为阳性；反之则为阴性。为了验证实验的有效性，还需设置阳性对照和阴性对照。阳性对照用于确认扩增试剂和设备的功能正常，而阴性对照则用来排除污染的可能性。只有当所有对照均符合预期时，才能对检测结果做出准确判断。

### 注意事项

标准还特别提醒，在整个实验过程中必须采取严格的防护措施，防止交叉污染。例如，不同样品的操作应在不同的工作台面上完成，并且使用一次性耗材。此外，对于可能受到污染的试剂和器材要及时更换或消毒处理。

登陆阅读剩余内容

登陆 注册