THBIQA 0001.11-2023 兽药制剂中非法添加19种非甾体类抗炎药物的测定 液相色谱-串联质谱法

本文以《THBIQA 0001.11-2023兽药制剂中非法添加19种非甾体类抗炎药物的测定 液相色谱-串联质谱法》中“样品前处理方法”为核心，分析其与旧版标准（假设为THBIQA 0001.11-2018）的主要差异，并结合实际操作详细解读新标准中该部分内容的具体应用。

样品前处理方法的变化

在THBIQA 0001.11-2023中，样品前处理方法从单纯的固相萃取改进为固相萃取结合在线衍生化技术。这一变化显著提升了检测灵敏度和准确性。具体而言：

1. 固相萃取优化：相较于旧版标准，新版标准对固相萃取柱的选择、活化溶剂及洗脱步骤进行了更严格的规范。例如，推荐使用C18反相硅胶柱，活化溶剂改为甲醇-水混合液（体积比7:3），洗脱剂则由乙腈调整为含0.1%甲酸的乙腈溶液。这些调整有效提高了目标化合物的回收率，减少了基质效应的影响。

2. 在线衍生化引入：这是新版标准的最大亮点。通过在液相色谱系统中引入衍生化反应器，将原本需要离线完成的衍生化过程集成到整个分析流程内。采用的衍生试剂为N,N-二甲基甲酰胺中的碘乙酰胺溶液，衍生温度设定为40℃，时间为5分钟。这种方法不仅大幅缩短了样品制备时间，还避免了人工操作可能带来的误差。

实际应用示例

假设某实验室需检测一批疑似含有双氯芬酸钠的宠物用药。按照THBIQA 0001.11-2023的标准进行操作：

1. 样品准备：取适量待测样品加入到容量瓶中，用水稀释至刻度线，充分摇匀后作为供试品溶液。

2. 固相萃取：

- 将固相萃取柱依次用3 mL甲醇-水混合液（7:3）活化。

- 吸取2 mL供试品溶液缓慢通过已活化的固相萃取柱，控制流速约每秒1滴。

- 使用5 mL含0.1%甲酸的乙腈溶液分两次洗脱吸附的目标化合物，收集全部洗脱液备用。

3. 在线衍生化：

- 将上述洗脱液直接注入液相色谱仪，仪器自动完成衍生化反应。

- 衍生完成后，依据设定的液相色谱条件进行分离。

4. 质谱检测：根据目标化合物的特征离子对，采用多反应监测模式（MRM）记录色谱峰面积，计算浓度值。

通过以上步骤，能够快速准确地完成样品中双氯芬酸钠等非甾体类抗炎药物的定量分析。相比旧版标准，此方法不仅简化了操作流程，还提高了数据的一致性和可靠性，特别适合高通量筛查需求。