DB51T 1843-2014 猪A群轮状病毒RT-PCR检测技术规范

DB51/T 1843-2014《猪A群轮状病毒RT-PCR检测技术规范》是四川省地方标准，规定了猪A群轮状病毒RT-PCR检测的技术要求。以下对部分重要条文进行详细解读：

【样本采集与处理】

标准中指出样本应采集自健康状况异常的仔猪，包括呕吐、腹泻等临床症状。采集部位为肛门拭子或肠内容物。样品应在4℃条件下保存并在24小时内完成检测。如果不能及时检测，需将样品置于-70℃冷冻保存。

【试剂准备】

使用的反转录酶、DNA聚合酶等关键试剂需符合国家相关规定。引物和探针的设计应基于已知的猪A群轮状病毒基因序列，确保特异性和灵敏度。试剂配制时要严格无菌操作，并设置阳性对照、阴性对照及空白对照。

【反应体系建立】

反应体系总体积一般为20μL，其中包含反转录酶、DNA聚合酶、引物、探针等成分。反应条件设定为42℃反转录60分钟，94℃预变性5分钟，然后进行40个循环的94℃变性15秒、55℃退火30秒、72℃延伸30秒。每个样品应设立三个重复孔以保证结果可靠性。

【结果判定】

Ct值小于等于35判为阳性，大于38判为阴性，介于两者之间需重复实验。阳性对照Ct值应小于25，阴性对照应无扩增曲线，否则实验无效。

以上是该标准中几个关键环节的详细解读，实际操作时应严格按照标准执行，确保检测结果准确可靠。