TCVMA 145-2024 牛呼吸道合胞体病毒实时荧光 RT-PCR 检测方法

摘要：本文件规定了牛呼吸道合胞体病毒实时荧光RT-PCR检测的原理、试剂与材料、仪器设备、样品处理、实验步骤、结果分析及报告。本文件适用于牛呼吸道合胞体病毒的实验室检测和诊断。
Title：Real-time Fluorescent RT-PCR Detection Method for Bovine Respiratory Syncytial Virus
中国标准分类号：B46
国际标准分类号：11.100.99

在TCVMA 145-2024《牛呼吸道合胞体病毒实时荧光RT-PCR检测方法》中，相较于旧版标准，实时荧光RT-PCR反应体系中的引物和探针设计是显著改进的部分。新版标准对引物和探针的设计原则、筛选流程以及验证要求进行了更加详尽的规定。

以探针设计为例，旧版标准仅简单提及需要特异性结合目标序列，而新版标准明确指出探针应为TaqMan探针，并且其长度应在20～30个碱基之间，GC含量控制在30%～80%，避免形成二级结构，同时探针与引物之间不得有互补序列。此外，还新增了针对探针的熔解曲线分析步骤，用于确认探针的特异性和稳定性。

具体应用时，首先根据牛呼吸道合胞体病毒基因组保守区域设计探针序列，然后通过生物信息学工具预测其二级结构及与其他核酸的交叉反应可能性。接着合成候选探针并进行初步实验验证，包括标准曲线绘制和阴性样本测试，确保探针具备高灵敏度和特异性。最后，在实际样品检测过程中，还需定期使用阳性对照和阴性对照来监控探针性能的变化，一旦发现探针失效需及时更换。

这一改进有效提升了检测结果的准确性与可靠性，特别是在临床诊断和流行病学调查中发挥着重要作用。