DB35T 1280-2012 大豆疫霉菌分子检测技术规程

摘要：本文件规定了大豆疫霉菌的分子检测方法，包括样品采集、DNA提取、PCR扩增及结果分析等技术要求。本文件适用于大豆疫霉菌的快速检测与鉴定。
Title：Technical Regulations for Molecular Detection of Soybean Phytophthora
中国标准分类号：B 05
国际标准分类号：65.020

《大豆疫霉菌分子检测技术规程》（DB35/T 1280-2012）是一项福建省地方标准，主要用于指导大豆疫霉菌的分子检测工作。以下是对该标准中一些关键条款的深入解读：

1. **适用范围**：本标准适用于大豆疫霉菌的分子检测，包括从样品采集到结果分析的全过程。这一规定明确了标准的应用领域和限制条件。

2. **术语和定义**：标准对“大豆疫霉菌”、“PCR扩增”等专业术语进行了明确界定，确保了检测过程中术语使用的统一性和准确性。

3. **样品采集与处理**：在样品采集环节，要求使用无菌工具采集新鲜样本，并立即置于低温环境中保存运输。样品处理部分强调了样本均质化的重要性，以保证后续检测数据的可靠性。

4. **核酸提取**：此部分详细描述了核酸提取的方法步骤，包括试剂的选择、操作流程及注意事项。特别指出要避免RNA酶污染，确保提取出高质量的DNA。

5. **引物设计与合成**：对于特异性引物的设计提出了具体要求，如长度、GC含量等参数，并建议通过BLAST比对验证其特异性。同时，还说明了引物合成后的质量控制措施。

6. **PCR反应体系建立**：给出了推荐的PCR反应体系组成成分及其浓度范围，还特别提醒注意添加内参基因用于对照实验。

7. **扩增条件设置**：提供了推荐的退火温度、循环次数等参数，以及如何优化这些参数的具体方法。此外，还讨论了不同仪器设备可能带来的差异性问题。

8. **结果判定**：根据电泳图谱判断是否含有目标片段，并给出阳性、阴性标准。同时，也提到了必要时可采用测序确认结果。

9. **质量控制**：包括空白对照、重复试验等内容，目的是保证检测结果的真实可靠。

登陆阅读剩余内容

登陆 注册