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摘要:本文件规定了樱桃致死黄化病的PCR检验鉴定方法的技术要求,包括样品采集、DNA提取、PCR扩增及结果分析等内容。本文件适用于樱桃致死黄化病的检测与诊断。
Title:Cherry Lethal Yellowing Disease PCR Testing and Identification Method
中国标准分类号:B 46
国际标准分类号:65.020
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拓展解读
DB51/T 1549-2012《樱桃致死黄化病PCR检验鉴定方法》是一项四川省地方标准,用于检测樱桃树因感染樱桃致死黄化病菌(Cherry Yellows Phytoplasma)而引起的疾病。该标准提供了从样本采集到最终结果判定的全过程操作指南。以下是对该标准中几个关键部分的重要条文进行详细解读:
样品采集与保存
条文说明:
- 样本选择:应从疑似患病植株的新梢、叶片或果实上采集样本。
- 采样时间:最好在发病初期进行采样。
- 样本保存:将采集好的样本放入无菌袋中,并尽快送至实验室,在4℃条件下短期保存;长期保存需置于-80℃。
核酸提取
条文说明:
- 试剂准备:使用专门针对植物组织设计的DNA提取试剂盒。
- 操作步骤:
- 将样本剪碎后加入裂解液中;
- 通过离心机高速离心以去除杂质;
- 最终获得纯净的DNA溶液,用于后续PCR反应。
PCR扩增条件设定
条文说明:
- 引物设计:根据目标基因序列设计特异性引物,确保其能够准确识别樱桃致死黄化病菌。
- 反应体系组成:
- 包括模板DNA、上下游引物、dNTPs、Mg²⁺及热启动酶等成分。
- 扩增程序:
- 预变性:95℃ 5分钟;
- 循环步骤:95℃ 30秒,55℃ 30秒,72℃ 1分钟,共35个循环;
- 最终延伸:72℃ 10分钟。
结果分析
条文说明:
- 电泳检测:将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,观察是否有预期大小的目标片段出现。
- 阳性对照与阴性对照:实验过程中必须设置相应的阳性对照(已知含有目标DNA片段的样品)和阴性对照(不含任何DNA的空白样本),以此验证实验的有效性和准确性。
- 结果判断:若在预定位置出现清晰且亮度适中的条带,则判定为阳性;反之则为阴性。
以上内容是基于DB51/T 1549-2012标准对樱桃致死黄化病PCR检验鉴定方法的一些核心环节进行了简要阐述。遵循这些规范化的流程有助于提高检测结果的可靠性,从而更好地服务于农业生产中的病害防控工作。