DB22T 1676-2012 冻鲜鱿鱼多种致病菌的测定 多重PCR法

《DB22/T 1676-2012冻鲜鱿鱼中多种致病菌的测定 多重PCR法》是一项专门用于检测冻鲜鱿鱼中致病菌的技术规范。以下对其中的关键内容进行深入解读。

该标准规定了使用多重PCR技术检测冻鲜鱿鱼样品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌的方法。在取样过程中要求从同一批次产品中随机抽取至少3个独立包装，总样品量不少于500克。样品需保持冷冻状态直至检测前，避免解冻。

对于样品处理环节，首先将样品均匀混合后取适量样品加入无菌生理盐水中制成1:10稀释液，充分振荡混匀后取上清液作为模板DNA来源。在提取DNA时推荐采用商品化试剂盒，严格按照说明书操作以确保DNA纯度与浓度满足后续扩增需求。

多重PCR反应体系包含特异性引物组以及反应缓冲液等成分。每种目标菌株都有其专属引物组合，能够特异性识别并扩增相应基因片段。反应条件通常包括预变性94℃ 5分钟；接下来进行30轮循环：94℃ 30秒，55℃ 30秒，72℃ 1分钟；最后延伸72℃ 5分钟。

结果判断依据为电泳图谱中出现对应大小的目的条带。若观察到与已知阳性对照相同的条带，则判定样品中含有相应致病菌。此外还需设置阴性对照和空白对照以排除假阳性和非特异性扩增干扰。

此标准还特别强调实验室应具备生物安全防护措施，并定期对仪器设备进行校准维护，保证检测结果准确可靠。同时建议定期参加能力验证活动，不断提升检测技术水平。

通过严格执行本标准，可以有效提高冻鲜鱿鱼制品中致病菌筛查效率，保障食品安全，减少食源性疾病发生风险。