DB35T 1276-2012 饲料中三聚氰胺快速检测 酶联免疫吸咐法

摘要：本文件规定了饲料中三聚氰胺快速检测的酶联免疫吸附法的原理、试剂和材料、仪器设备、样品处理、测定步骤、结果计算与表达、精密度要求。本文件适用于饲料原料及配合饲料中三聚氰胺的快速筛查检测。
Title：Rapid Detection of Melamine in Feed by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
中国标准分类号：B46
国际标准分类号：67.040

DB35/T 1276-2012《饲料中三聚氰胺快速检测 酶联免疫吸咐法》是一项福建省地方标准，用于饲料中三聚氰胺的快速检测。以下是对该标准中一些关键条文的详细解读：

### 范围

本标准规定了使用酶联免疫吸附法（ELISA）测定饲料中三聚氰胺含量的方法。适用于各类饲料原料及成品饲料中的三聚氰胺检测。

### 原理

基于抗原抗体特异性结合反应原理，利用三聚氰胺作为抗原制备抗体，通过酶标板吸附抗体与样品中的三聚氰胺竞争性结合，再加入显色剂显色后测定吸光度值来判断是否存在三聚氰胺及其浓度。

### 试剂和材料

1. **三聚氰胺标准品**：纯度不低于99%，用于制作标准曲线。

2. **包被液**：含一定浓度的磷酸盐缓冲液。

3. **洗涤液**：主要成分为Tween-20的磷酸盐缓冲液。

4. **底物溶液**：通常为过氧化氢与四甲基联苯胺组成的混合液。

### 样品处理

取适量样品粉碎并称重，加入适量蒸馏水或稀释液充分混匀后静置一段时间以确保完全溶解。然后过滤去除不溶物，取滤液备用。

### 测定步骤

1. 将已知浓度的标准品和待测样品分别加入到预先包被有特异性抗体的酶标板孔中。

2. 加入酶标记的二抗，使其与未结合的一抗发生反应。

3. 经过洗涤去除未结合物质后，加入底物溶液显色。

4. 使用酶标仪测量各孔的吸光度，并绘制标准曲线，根据样品吸光度值计算出三聚氰胺含量。

### 结果计算

根据标准曲线上的吸光度值对应浓度点，计算出样品中三聚氰胺的实际含量。如果样品吸光度低于最低标准曲线点，则报告为“未检出”。

### 注意事项

- 实验过程中应严格控制温度、时间等条件，避免因操作不当导致结果偏差。

- 每次实验都需设立空白对照和阳性对照，以验证试剂的有效性和实验过程的准确性。

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