DB22T 1589-2012 高粱品种鉴定 DNA指纹法（SSR）

DB22/T 1589-2012是吉林省地方标准，规定了利用简单重复序列（SSR）分子标记技术对高粱品种进行DNA指纹鉴定的方法。以下为关键内容的详细解读：

在术语和定义部分明确指出：DNA指纹图谱是指由多个SSR引物扩增得到的一组特异性条带模式；品种特异性是指不同品种间具有独特且稳定的DNA指纹图谱特征。

样品采集要求取样量不少于1克新鲜叶片或等量干物质，并确保样本来源清晰准确。

DNA提取步骤中强调使用CTAB法提取高质量基因组DNA，其纯度A260/A280应在1.8～2.0之间，浓度不低于50ng/μL。

PCR反应体系需包含20～40ng模板DNA、0.2μmol/L正向引物与反向引物、1×PCR缓冲液及适量Mg2+、dNTPs和1U Taq酶。

采用荧光标记引物进行PCR扩增后，通过毛细管电泳检测产物长度，以确定每个SSR位点的等位基因大小。

数据分析时，应选择至少10个具有高度多态性的SSR标记，每对引物扩增出的条带需清晰可辨，无非特异性扩增产物。

根据所得数据构建各品种的独特指纹图谱，当两个品种间的相似系数小于0.85时，则判定为不同品种。

此外，该标准还要求建立高粱品种DNA指纹数据库，定期更新并维护，以便于后续鉴定工作的开展。