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摘要:本文件规定了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法的技术要求,包括试剂准备、操作步骤、结果判定及注意事项。本文件适用于口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的实验室检测和监测。
Title:Detection method of Foot-and-Mouth Disease Virus non-structural protein antibodies by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
中国标准分类号:B46
国际标准分类号:11.220
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拓展解读
DB42/T 793-2012《口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验检测方法》是一项湖北省地方标准,主要用于检测动物体内针对口蹄疫病毒非结构蛋白的抗体。以下是对该标准中一些重要条文的详细解读:
1. 适用范围:本标准适用于牛、羊、猪等偶蹄动物血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的定性检测。这一范围明确了标准的应用对象和检测目的,即通过检测非结构蛋白抗体来判断动物是否感染了口蹄疫病毒。
2. 试剂与材料:标准要求使用经批准的口蹄疫病毒非结构蛋白ELISA检测试剂盒。试剂盒应包含抗原、酶标二抗以及显色剂等关键成分,并且所有试剂都需符合相关质量控制标准。正确选择和使用合格的试剂是保证检测结果准确性的基础。
3. 样品处理:在采集样本时,应从健康部位抽取血液样本,并尽快分离出血清用于实验。对于保存条件,建议将血清置于-20℃以下低温环境中以防止蛋白质降解。此外,在操作过程中要避免样本受到污染或变质。
4. 实验步骤:
- 首先按照说明书准备所需浓度的标准品及稀释液。
- 将待测血清样本与阴性和阳性对照一同加入到微孔板相应位置。
- 加入适量的酶标二抗后孵育一定时间。
- 使用底物溶液显色,并记录吸光度值。
这些步骤确保了整个检测过程的一致性和可重复性。
5. 结果判定:根据测定得到的OD值(光密度),计算样品相对于阳性对照的S/P比值。如果S/P比值大于等于临界值,则判定为阳性;反之则为阴性。此方法能够有效地区分出感染与否的情况。
6. 质量控制:每次实验均需设置阴性对照、阳性对照以及空白对照,以验证实验体系的有效性。同时定期对仪器设备进行校准维护,确保数据准确性。
通过以上内容可以看出,DB42/T 793-2012不仅提供了详细的检测流程,还强调了各个环节的质量控制措施,这对于提高检测结果的可靠性和科学性具有重要意义。