TCALAS 107-2021 实验动物 钩端螺旋体检测方法

TCALAS 107-2021《实验动物 钩端螺旋体检测方法》相较于旧版标准在检测技术和操作细节上有了显著改进。本文将聚焦于“显微镜凝集试验（MAT）”这一核心检测方法的变化，并对其在实际应用中的具体操作进行详细解读。

显微镜凝集试验（MAT）的变化与应用

# 变化点分析

在新标准中，显微镜凝集试验的操作步骤更加细化，尤其对血清稀释比例和钩端螺旋体抗原制备的要求更为严格。例如，新版标准明确规定了血清稀释液需使用无菌磷酸盐缓冲溶液（PBS），并且要求每次试验前应对抗原进行活性检测以确保其有效性。此外，还增加了对实验环境温度和湿度的具体控制要求，这有助于提高试验结果的一致性和准确性。

# 应用方法详解

1. 样本准备：首先需要采集实验动物血液样本，并立即分离血清备用。确保血清保存条件符合标准要求，通常为-20℃以下冷冻保存。

2. 抗原准备：按照标准要求制备钩端螺旋体抗原。此过程包括选择合适的菌株、培养基质以及收获期等关键环节。制备完成后，需通过显色反应或其他生物化学手段验证抗原活性。

3. 试验操作：

- 将不同浓度梯度的血清样品加入到含有固定量抗原的反应孔内；

- 每个稀释度设三个重复孔；

- 在37℃条件下孵育48小时后观察结果；

- 使用相差显微镜检查是否存在凝集现象。

4. 结果判定：根据是否出现明显凝集现象来判断样品中是否存在特异性抗体。如果某一样品在一个或多个稀释度下显示出清晰可见的凝集，则认为该样品呈阳性反应。

5. 数据记录与分析：记录每个稀释度下的凝集强度，并绘制剂量-效应曲线。通过比较不同批次之间的变异情况评估试验稳定性。

通过以上详细步骤的应用，可以有效提升实验动物钩端螺旋体感染状况监测工作的科学性和可靠性。同时，遵循新版标准不仅能够保证检测结果准确无误，还能最大程度地减少人为误差因素的影响。