TCALAS 107-2021 实验动物 钩端螺旋体检测方法

摘要：本文件规定了实验动物钩端螺旋体的检测方法，包括样品采集、核酸提取、PCR扩增及血清学检测等步骤。本文件适用于实验动物中钩端螺旋体感染的诊断和监测。
Title：Experimental Animals - Detection Method of Leptospira
中国标准分类号：B43
国际标准分类号：11.120

TCALAS 107-2021《实验动物 钩端螺旋体检测方法》相较于旧版标准在检测技术和操作细节上有了显著改进。本文将聚焦于“显微镜凝集试验（MAT）”这一核心检测方法的变化，并对其在实际应用中的具体操作进行详细解读。

### 显微镜凝集试验（MAT）的变化与应用

#### 变化点分析

在新标准中，显微镜凝集试验的操作步骤更加细化，尤其对血清稀释比例和钩端螺旋体抗原制备的要求更为严格。例如，新版标准明确规定了血清稀释液需使用无菌磷酸盐缓冲溶液（PBS），并且要求每次试验前应对抗原进行活性检测以确保其有效性。此外，还增加了对实验环境温度和湿度的具体控制要求，这有助于提高试验结果的一致性和准确性。

#### 应用方法详解

1. **样本准备**：首先需要采集实验动物血液样本，并立即分离血清备用。确保血清保存条件符合标准要求，通常为-20℃以下冷冻保存。

2. **抗原准备**：按照标准要求制备钩端螺旋体抗原。此过程包括选择合适的菌株、培养基质以及收获期等关键环节。制备完成后，需通过显色反应或其他生物化学手段验证抗原活性。

3. **试验操作**：

- 将不同浓度梯度的血清样品加入到含有固定量抗原的反应孔内；

- 每个稀释度设三个重复孔；

- 在37℃条件下孵育48小时后观察结果；

- 使用相差显微镜检查是否存在凝集现象。

4. **结果判定**：根据是否出现明显凝集现象来判断样品中是否存在特异性抗体。如果某一样品在一个或多个稀释度下显示出清晰可见的凝集，则认为该样品呈阳性反应。

5. **数据记录与分析**：记录每个稀释度下的凝集强度，并绘制剂量-效应曲线。通过比较不同批次之间的变异情况评估试验稳定性。

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