TGRM 099-2024 深色有隔内生菌胞外聚合物改良土壤技术章程

深色有隔内生菌（Dark Septate Endophytes, DSE）是一类广泛存在于植物根系中的共生微生物，其胞外聚合物在改良土壤结构、提升土壤肥力和促进植物生长方面具有显著作用。TGRM 099-2024《深色有隔内生菌胞外聚合物改良土壤技术章程》对DSE的应用进行了系统规范。本文聚焦于新旧版本标准中关于“菌株筛选与鉴定”这一核心环节的变化，深入解析其改进之处及其实际应用方法。

菌株筛选与鉴定：从经验到科学的转变

# 新旧版本的主要差异

在旧版标准（假设为TGRM 099-2018）中，菌株筛选主要依赖于实验室培养观察和显微镜下形态特征分析，这可能导致误判或漏检。而新版标准引入了分子生物学手段，如PCR扩增和DNA序列比对，显著提高了筛选结果的准确性与可靠性。

# 应用方法详解

1. 样本采集

首先需要从目标植物根际土壤中采集样品。推荐使用无菌工具，避免外界污染。将采集到的样本置于低温环境中运输至实验室。

2. 初步分离

将土壤样本接种于适合DSE生长的选择性培养基上，例如含高浓度蔗糖和低氮源的培养基。经过7-14天的恒温培养后，挑选出具有典型DSE特征的菌落。

3. 分子鉴定流程

- 提取DNA：采用CTAB法或其他高效提取试剂盒，确保DNA质量。

- PCR扩增：设计特异性引物，扩增目标区域（如ITS区）。反应体系应包括模板DNA、引物、dNTPs及耐热DNA聚合酶等成分。

- 测序与比对：送测序公司完成双向测序，并通过公共数据库（如NCBI）进行序列比对，确认菌种归属。

4. 验证实验

对选定的菌株进行进一步的功能测试，比如测定其胞外聚合物产量、对重金属抗性的表现以及促进植物生长的能力等。

通过上述步骤，可以更加精准地筛选出符合要求的DSE菌株，从而指导后续的土壤改良实践。这种基于分子技术的方法不仅提升了工作效率，还增强了结果的可信度，为推动该领域的发展奠定了坚实基础。