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摘要:本文件规定了紫花苜蓿高通量基因型鉴定分析的术语和定义、样品采集与处理、DNA提取、质量检测、高通量测序、数据分析及结果解释的要求。本文件适用于紫花苜蓿种质资源鉴定、品种选育及相关遗传研究中的基因型分析。
Title:Technical Regulations for High-throughput Genotyping Analysis of Alfalfa (Medicago sativa)
中国标准分类号:B 61
国际标准分类号:65.020.20
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拓展解读
本文将聚焦于THXCY 99-2024《紫花苜蓿高通量基因型鉴定分析技术规程》中新旧版本间的一项关键差异——“样本DNA提取方法”的变化,并对其在实际应用中的具体操作进行详细解读。
在旧版标准中,样本DNA提取主要依赖传统的CTAB法。这种方法虽然能够满足基本需求,但存在耗时较长、试剂毒性较大以及对操作者技术要求较高等问题。而在新版标准中,推荐使用商业化DNA提取试剂盒结合自动化工作站的方法。这种新方法不仅大幅缩短了操作时间,还提高了提取效率和结果的一致性。
以某农业科研机构为例,他们在实施THXCY 99-2024时,采用了Promega公司的Wizard® Genomic DNA Purification Kit结合Kingfisher Flex自动化核酸提取系统。首先,按照试剂盒说明书准备所需材料及设备,确保所有仪器均处于正常工作状态。然后,取适量新鲜叶片组织置于离心管中,加入裂解缓冲液后立即放入自动工作站。通过预设程序完成细胞裂解、蛋白酶K消化、DNA结合、洗涤与洗脱等步骤。整个过程无需手动干预,约45分钟后即可获得高质量的DNA样品。
值得注意的是,在实际应用过程中还需注意以下几点:一是要根据样品类型调整初始样本量;二是定期校准仪器并验证试剂的有效期;三是妥善处理废弃物以保障实验室安全。此外,为保证数据可靠性,建议每次实验设立阳性对照组与阴性对照组,并对提取后的DNA浓度及纯度进行检测。
综上所述,THXCY 99-2024中关于样本DNA提取方法的改进显著提升了工作效率与质量控制水平,值得相关领域从业者积极采纳推广。