TSDAQI 043-2021 饲料中沙门氏菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌三重荧光定量PCR快速检测方法

饲料中沙门氏菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌是影响动物健康和食品安全的重要因素。TSDAQI 043-2021标准规定了采用三重荧光定量PCR技术进行检测的方法，但实际操作中仍有优化空间。

在样品前处理环节，可以引入自动化设备减少人为误差。例如使用均质器替代传统手工研磨，提高均质效率和均匀度。同时通过调整缓冲液配方，缩短提取时间至30分钟以内。

扩增阶段可通过优化引物探针设计提升特异性。建议结合生物信息学工具预测非靶标序列交叉反应风险，并增加内参基因监控体系稳定性。反应体系中适当降低镁离子浓度有助于抑制非特异性扩增。

数据分析时利用多通道数据整合算法，实现三种病原体的同时定量分析。建立基于实时荧光曲线变化规律的自动判读模型，减少人工判断偏差。此外，构建本地化标准曲线数据库，避免频繁购买参考品增加成本。

仪器维护方面定期校准荧光检测模块，保持信号采集精度。建立温控系统自检程序，确保退火延伸温度准确稳定。对于试剂耗材可采用集中采购策略降低单次使用成本。

通过上述措施，该检测方法在保证准确性的同时，显著提升了操作灵活性和经济性。