TSDVMA 003-2024 鉴别多杀性巴氏杆菌与溶血性曼氏杆菌的双重PCR方法

在TSDVMA 003-2024《鉴别多杀性巴氏杆菌与溶血性曼氏杆菌的双重PCR方法》中，有一项重要的更新是明确了内参基因的选择和使用方法。这一改动对于确保检测结果的准确性具有重要意义。

在旧版标准中，并未明确规定内参基因的具体类型及作用机制，这可能导致不同实验室间的结果可比性较差。新版标准明确指出，在进行双重PCR时，应选择β-肌动蛋白（ACTB）作为内参基因。此基因广泛存在于哺乳动物细胞中且表达稳定，能够有效监控反应体系的效率以及样本质量。

具体应用时，首先需要设计一对特异性引物用于扩增目标病原体DNA序列，同时设计另一对引物专门针对ACTB基因区域。在实验操作过程中，将待测样品与已知阳性对照、阴性对照一同加入到PCR反应体系中。通过对比目标病原体与内参基因的Ct值，可以评估样本中是否存在抑制因素或者核酸提取是否充分。

例如，在检测过程中如果发现目标病原体Ct值较高而ACTB Ct值正常，则可能意味着样本中含有抑制剂；反之，若ACTB未能扩增成功，则需重新检查样本准备步骤。这种双重监测机制不仅提高了检测结果的可靠性，还增强了不同批次间数据的一致性，为临床诊断提供了更加准确的信息支持。