TCACM 1027.104-2018 铁皮石斛PCR鉴定

铁皮石斛是一种珍贵的药用植物，其DNA条形码技术在物种鉴定中具有重要意义。TCACM 1027.104-2018标准为铁皮石斛的PCR鉴定提供了科学依据和技术指导。该标准规定了使用ITS2序列作为DNA条形码进行PCR扩增的具体操作流程和质量控制要求。

首先，在样本采集阶段，应选择新鲜的铁皮石斛植株叶片或茎段组织，确保样本无污染且保存条件适宜。提取基因组DNA时，推荐采用CTAB法或其他高效DNA提取试剂盒，保证DNA纯度和完整性达到后续实验要求。

PCR扩增反应体系需严格按照标准中的配方配制，包括特异性引物、dNTPs、Taq DNA聚合酶等成分。扩增程序设定为预变性95℃ 5分钟；35个循环：94℃ 30秒，55℃ 30秒，72℃ 1分钟；最后72℃延伸7分钟。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测，预期大小约为200bp左右。

为了提高鉴定结果的准确性，标准还强调了对扩增产物进行双向测序，并通过比对ITS2数据库确认种属归属。同时要求实验室建立内部质控体系，包括阳性对照、阴性对照以及空白对照，以排除假阳性和假阴性结果。

此外，标准还提出了数据管理规范，要求记录完整的实验信息，包括样本来源、提取方法、扩增条件等，以便于结果追溯和验证。这些措施共同保障了铁皮石斛PCR鉴定的可靠性和可重复性，为中药材真伪鉴别提供了有力的技术支撑。