TSHRH 027-2019 体外测试 B16细胞黑素合成抑制实验

B16细胞黑素合成抑制实验是评估潜在美白剂或色素沉着抑制剂效果的重要方法，依据TSHRH 027-2019标准进行操作可以确保结果的科学性和可靠性。以下是基于该标准开展实验的一些关键点：

首先，在实验开始前需要准备足够的B16小鼠黑色素瘤细胞，并将其置于含有10%胎牛血清的DMEM完全培养基中，在37℃、5%CO2条件下培养至对数生长期。

接着制备待测样品溶液，通常采用二甲基亚砜（DMSO）作为溶剂配制成不同浓度梯度。同时设立空白对照组（仅含培养基和细胞）、阳性对照组（如氢醌等已知抑制剂）以及溶剂对照组。

将上述处理后的细胞以每孔5×10^4个细胞的数量接种于96孔板中，每组设置三个重复孔。然后加入相应浓度的样品溶液后继续孵育24小时。在此期间，细胞会吸收样品并产生相应的生理反应。

接下来通过MTT法测定各组细胞存活率。具体做法是在孵育结束后向每孔加入20μL浓度为0.5mg/mL的MTT溶液，再孵育4小时。之后小心吸去上清液，并加入150μL DMSO溶解形成的蓝紫色甲瓒晶体。使用酶标仪在570nm波长下测量各孔吸光度值。

最后根据公式计算出相对细胞存活率=（实验组OD值/空白对照组OD值）×100%，以此来判断待测样品对B16细胞黑素合成的影响程度。如果相对存活率显著低于阳性对照，则表明该样品具有较强的黑素合成抑制作用。

在整个过程中严格遵守无菌操作规程，确保数据的真实性和准确性。此外还应注意记录每次实验的具体条件参数，便于后续分析比较。