TCVMA 11-2018 伪狂犬病毒微滴式数字PCR检测方法

摘要：本文件规定了伪狂犬病毒微滴式数字PCR检测的原理、试剂与材料、仪器设备、样品处理、检测步骤及结果分析。本文件适用于伪狂犬病毒的定性和定量检测，可用于动物疫病防控及相关研究领域。
Title：Digital PCR Detection Method for Pseudorabies Virus by Droplet Technology
中国标准分类号：B46
国际标准分类号：11.100.99

伪狂犬病是由伪狂犬病毒（PRV）引起的一种重要动物传染病，对养猪业造成了极大的经济损失。为了更准确地检测该病毒的存在，TCVMA 11-2018《伪狂犬病毒微滴式数字PCR检测方法》应运而生。本文将详细介绍这一标准的核心内容及其实际应用价值。

### 标准概述

TCVMA 11-2018规定了一种基于微滴式数字PCR技术的伪狂犬病毒检测方法。这种方法通过将样本DNA分散成数以万计的微小液滴，在每个液滴中独立进行扩增反应，从而实现高精度的目标基因定量分析。与传统实时荧光定量PCR相比，微滴式数字PCR具有更高的灵敏度和特异性，能够更精确地检测到低拷贝数的目标DNA片段。

### 方法原理

该标准采用微滴式数字PCR技术，首先提取待测样本中的总DNA，然后设计特异性引物和探针针对伪狂犬病毒的特定基因区域进行扩增。扩增后的产物被封装成微小液滴，并在热循环仪上完成扩增过程。最后，利用微滴读取设备统计阳性液滴数量，根据泊松分布计算出目标DNA的初始浓度。

### 操作步骤

1. **样品准备**：采集疑似感染动物的组织或分泌物样本，按照标准操作规程提取其中的总DNA。

2. **反应体系构建**：配制包含特异性引物、探针以及酶类等成分的反应混合物。

3. **生成微滴**：使用专门设备将上述反应混合物转化为含有大量微小液滴的形式。

4. **PCR扩增**：将生成的微滴置于热循环仪内进行多轮循环扩增。

5. **数据分析**：收集扩增后的数据，通过专业软件分析得到最终结果。

### 应用价值

此标准的应用不仅提高了伪狂犬病毒检测的准确性，还大大缩短了检测周期。特别是在疫病防控期间，快速准确地识别病原体对于采取有效措施防止疾病传播至关重要。此外，由于其高灵敏度的特点，即使在病毒载量较低的情况下也能检测出来，这对于早期预警系统来说是一个巨大的进步。

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