DB50T 1763-2024 四种致兔腹泻病原菌检测 多重PCR法

摘要：本文件规定了采用多重PCR法检测兔腹泻相关四种病原菌的技术要求、方法步骤和结果判定。本文件适用于兔腹泻样品中大肠杆菌、沙门氏菌、产气荚膜梭菌和轮状病毒的同步检测与鉴定。
Title：Detection of Four Diarrhea-causing Pathogens in Rabbits by Multiplex PCR - DB50T 1763-2024
中国标准分类号：B46
国际标准分类号：07.100.99

DB50/T 1763-2024《致兔腹泻四种病原菌多重PCR检测方法》是一项专门用于检测兔子腹泻相关病原菌的标准。该标准通过多重PCR技术，能够同时检测四种主要引起兔腹泻的病原菌，包括魏氏梭菌A型、产气荚膜梭菌C型、肠炎沙门氏菌以及兔密螺旋体。下面我将从标准的关键内容出发，选取重要条文进行详细解读。

首先，在样品采集部分，标准要求样本应来源于疑似患有腹泻症状的兔子肠道内容物或粪便，并且需要在4℃条件下保存和运输至实验室。这一步骤对于确保检测结果的真实性和准确性至关重要，因为样本的新鲜度直接影响到后续实验的成功率。

接着，在核酸提取环节，标准规定了使用商业化试剂盒来进行DNA/RNA的提取工作。选择合适的提取方法不仅关系到最终产物的质量，还会影响后续扩增反应的效果。因此，严格按照说明书操作显得尤为重要。

第三部分是引物设计与优化，这是整个流程中最为核心的部分之一。标准中提到，所使用的引物需针对每种目标病原菌特异性序列设计，并经过严格筛选以避免非特异性结合现象的发生。此外，还特别强调了引物浓度及退火温度等参数的调整，这些都是保证多重PCR顺利进行的关键因素。

第四点关于反应体系构建，包括模板DNA量、各种酶类试剂的比例以及反应缓冲液的选择等方面都有明确指示。合理的体系配置有助于提高灵敏度和特异性，从而获得更可靠的结果。

最后，在数据分析阶段，标准给出了如何判定阳性阴性的具体标准，并提醒操作人员注意排除假阳性和假阴性的情况。同时建议采用内部对照来监控整个过程的有效性。

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