DB3707T 133-2024 西瓜枯萎病菌鉴定技术规程

DB3707/T 133-2024《西瓜枯萎病菌鉴定技术规程》是山东省潍坊市发布的推荐性地方标准，该标准规定了西瓜枯萎病菌的分离培养、形态观察、致病性测定以及分子生物学检测等方法。以下为标准中的一些关键内容及其解读：

【分离培养】

标准要求从疑似发病植株的根茎部取样，在PDA培养基上进行平板划线分离纯化。这一过程需要在无菌条件下操作以避免污染。通过多次转接确保获得单一菌落，这是后续鉴定的基础。

【形态观察】

将纯化的菌株接种于PDA斜面培养基上，25℃恒温培养7天后观察菌落特征及孢子形态。西瓜枯萎病菌通常表现为灰白色至淡黄色绒毛状菌落，分生孢子梗呈瓶梗状，顶端有多个分生孢子梗，分生孢子多为椭圆形或卵圆形。这些典型的微观结构有助于初步判断是否为西瓜枯萎病菌。

【致病性测定】

采用健康西瓜幼苗进行盆栽试验，将分离得到的菌株接种于幼苗根部，设置对照组。经过一定时间培养后，观察并记录发病情况。如果接种组出现典型症状而对照组正常，则可判定该菌株具有致病性。此步骤用于验证分离出的菌株确实是引起西瓜枯萎病的病原体。

【分子生物学检测】

利用特异性引物对目标DNA片段进行PCR扩增，并通过琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。此外还可以采用实时荧光定量PCR技术进一步确认。这种方法能够快速准确地识别病原菌，尤其适用于大量样本的同时检测。

以上内容构成了西瓜枯萎病菌鉴定的主要技术流程，各环节紧密相连，共同保证了鉴定结果的可靠性。标准中还特别强调了实验过程中应严格遵守生物安全规范，防止病原菌扩散造成危害。