DB15T 3747—2024 羊布鲁氏菌免疫抗体(M5-90Δ26株)与感染抗体鉴别检测ELISA法

DB15/T 3747—2024《羊布鲁氏菌免疫抗体(M5-90Δ26株)与感染抗体鉴别检测 ELISA法》是一项内蒙古自治区地方标准，旨在提供一种高效、准确的检测方法来区分羊布鲁氏菌病疫苗接种后产生的免疫抗体和自然感染所产生的抗体。这项标准对于控制和预防布鲁氏菌病在羊群中的传播具有重要意义。

关键条文解读

# 1. 范围

该标准适用于使用酶联免疫吸附试验（ELISA）对羊布鲁氏菌病免疫抗体和感染抗体的鉴别检测。明确了适用对象为羊，且检测技术基于ELISA原理。

# 2. 规范性引用文件

标准中引用了GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法以及GB/T 21296 动物布鲁氏菌病诊断技术等国家标准或行业标准。这些引用文件确保了实验用水的质量及诊断技术的一致性。

# 3. 术语和定义

- 免疫抗体：由疫苗接种引发机体产生的抗体。

- 感染抗体：因细菌感染而产生的抗体。

- 阳性对照血清：用于验证试剂盒性能的标准物质。

- 阴性对照血清：用于排除非特异性反应的标准物质。

# 4. 原理

本方法利用抗原与抗体之间的特异性结合反应，在固相载体上通过酶促显色反应显示结果。具体步骤包括样本处理、包被液制备、加样、温育、洗涤、显色、终止等过程。

# 5. 试剂与材料

所需试剂主要包括抗原、抗体、酶标二抗、底物溶液等。所有试剂均需符合相关质量要求，并经过严格的质量控制程序。

# 6. 仪器设备

需要配备酶标仪、移液器、恒温培养箱等专业设备以保证实验操作的精确性和可靠性。

# 7. 样品采集与保存

从健康或疑似患病的羊只抽取血液样本，立即分离血清并低温保存直至检测前。强调了新鲜样本的重要性以及避免反复冻融的要求。

# 8. 操作步骤

详细描述了每一步骤的操作细节，如样品稀释比例、温育时间、洗涤次数等关键参数。同时指出实验过程中应注意的安全事项，比如佩戴手套、避免交叉污染等。

# 9. 结果判断

根据OD值比值来判定结果，通常设置临界值为1.0。当比值≥1.0时判为阳性；当比值<1.0时判为阴性。此外还提供了详细的计算公式用于进一步确认结果。

# 10. 质量控制

为了保证检测结果的准确性，必须定期进行内部质控和外部质控。这包括但不限于阳性对照、阴性对照、空白对照等设置，并记录每次实验的数据以便追溯。

# 11. 注意事项

强调了实验人员应接受专业培训才能上岗；实验废弃物需按照规定妥善处置；不同批次间的试剂不能混用；实验环境应保持清洁无尘等多方面内容。

综上所述，《羊布鲁氏菌免疫抗体(M5-90Δ26株)与感染抗体鉴别检测 ELISA法》不仅提供了科学严谨的技术方案，同时也注重实际操作中的每一个环节，力求达到最佳检测效果。这对于有效防控布鲁氏菌病具有积极作用。