DB23T 3873—2024 实验动物 实验猪副流感病毒5型RT-PCR检测技术规范

DB23/T 3873—2024《实验动物 实验猪副流感病毒5型RT-PCR检测技术规范》是黑龙江省发布的关于实验猪副流感病毒5型检测的技术标准。以下选取了几个关键条款进行详细解读。

5.1 样品采集部分规定了样品的采集方法和保存条件。要求使用无菌容器采集实验猪的鼻拭子、咽喉拭子或肺组织样本，采集后立即置于-70℃冷冻保存，最长不超过6个月。这一规定确保了样本的新鲜度和完整性，避免在运输和保存过程中因温度不当导致病毒失活。

5.2 RNA提取部分明确了采用商品化RNA提取试剂盒进行核酸提取。强调要严格遵守试剂说明书操作，保证提取效率。同时要求使用无RNA酶的耗材和试剂，防止外源性RNA酶对样本造成污染。

6.1 RT-PCR反应体系构建部分规定了反应体系的组成成分及其终浓度。包括反转录酶、荧光探针、引物、酶缓冲液等。特别指出引物和探针的设计应覆盖病毒基因组保守区域，并经过验证具有特异性。这一步骤对于确保检测结果的准确性至关重要。

6.2 RT-PCR扩增程序部分详细说明了退火温度、延伸时间等参数设置。要求采用两步法进行扩增，第一阶段为反转录，第二阶段为PCR扩增。整个过程需要严格控制温度和时间，以获得最佳扩增效果。

7 结果判定部分明确了阳性、阴性和可疑结果的标准。当Ct值小于阈值时判定为阳性，大于阈值且信号强度较低时判定为可疑，大于阈值且无信号时判定为阴性。此外还要求对可疑结果进行重复检测或进一步验证。

这些条文共同构成了完整的检测流程，从样品采集到结果判定都有明确的规定，确保了检测结果的科学性和可靠性。在实际应用中，实验室应严格按照标准执行，以获得准确可靠的检测数据。