DB46T 644-2024 咖啡果小蠹快速分子鉴定技术规程

《DB46/T 644-2024咖啡果小蠹快速分子鉴定技术规程》是一项针对咖啡果小蠹这一重要农业害虫的快速检测方法标准。以下选取部分关键条款进行深入解读。

5.1 样品采集与保存

本条款规定了样品采集的基本要求，包括选择代表性样本、确保样本新鲜度以及采用适当的保存方式。例如，采集后的样本应立即置于-20℃冷冻保存，以防止DNA降解，这对于后续的分子检测至关重要。

5.3 基因组DNA提取

此部分明确了DNA提取的具体步骤和注意事项。强调使用高效的DNA提取试剂盒，并且在操作过程中要严格遵守无菌操作原则，避免污染。同时指出，提取得到的DNA浓度需达到一定标准（如≥20 ng/μL），纯度A260/A280应在1.8～2.0之间。

7.1 PCR反应体系建立

PCR反应体系的构建是整个检测过程的核心环节之一。该条款详细描述了反应液配制的比例：2×Premix Taq HotStart DNA Polymerase 12.5 μL，正向引物（10 μmol/L）0.5 μL，反向引物（10 μmol/L）0.5 μL，模板DNA 1.0 μL，ddH2O补足至25 μL。此外还特别提到退火温度设定为60℃，循环次数为35次等参数设置。

9.2 结果判断依据

对于最终结果判定给出了明确的标准：当Ct值≤35时视为阳性；若Ct值>35但≤40，则需重复实验；而Ct值>40则判定为阴性。这种严格的判读标准能够有效保证检测结果的准确性与可靠性。

以上内容是对DB46/T 644-2024中一些关键性条款的深度解析，旨在帮助使用者更好地理解和应用这项技术规程。