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资源简介
摘要:本文件规定了产气荚膜梭菌的分离与鉴定的操作步骤、方法和要求。本文件适用于食品、环境、临床样本中产气荚膜梭菌的检测与分析。
Title:Clostridium perfringens Isolation and Identification Procedure
中国标准分类号:C05
国际标准分类号:07.100.99 -
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拓展解读
《DB15/T 3438—2024 产气荚膜梭菌分离与鉴定操作规程》是内蒙古自治区制定的一项地方标准,该标准为产气荚膜梭菌的分离和鉴定提供了规范化的操作流程。以下是对该标准中一些重要条文的详细解读:
1. **样品采集**
- 标准规定样品应从病死动物的肝脏、脾脏等组织以及肠道内容物中采集。这是基于产气荚膜梭菌在这些部位易于繁殖的特点。
- 采集时需使用无菌工具,并立即置于厌氧环境中保存以防止细菌死亡或变异。
2. **样品处理**
- 样品需要经过预处理,包括研磨和稀释,以便于后续培养。研磨过程中要确保彻底均匀,避免因局部浓度过高影响结果准确性。
3. **培养条件**
- 使用胰蛋白胨大豆琼脂(TSAYE)作为基础培养基,在37℃条件下进行厌氧培养。这种培养基能够提供产气荚膜梭菌生长所需的各种营养成分,并且通过控制氧气含量来模拟其自然生存环境。
- 培养时间通常为24至48小时,期间需定期观察菌落形态变化。
4. **初步鉴定**
- 观察到典型菌落特征后,可以通过革兰氏染色法确认是否为革兰氏阳性粗大杆菌。此外还需检测溶血现象,产气荚膜梭菌一般会在血液琼脂平板上产生β-溶血环。
5. **生化试验**
- 进行一系列生化反应测试如乳糖发酵试验、甘露醇发酵试验等,进一步验证菌株特性。例如,产气荚膜梭菌能分解乳糖并产生大量气体。
6. **分子生物学方法**
- 对疑似菌株采用PCR技术扩增特异性基因片段,如cpe基因,用于最终确认。这种方法具有高度敏感性和特异性,可以有效排除其他相似菌种干扰。
7. **报告撰写**
- 完成所有实验步骤后,应当详细记录每一步骤的操作细节及观察结果,并据此撰写完整的报告。报告内容应包括但不限于样本信息、实验过程、结果分析以及结论部分。
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最后更新时间 2025-06-03