DB22T 1828-2013 农产品中沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的多重 PCR 检测

DB22/T 1828-2013 是吉林省地方标准，规定了农产品中沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR检测方法。以下是对该标准中关键条款的解读：

样品采集与处理

标准要求样品应具有代表性，采样量需满足检验需求。样品在采集后应尽快送往实验室进行检测，若不能及时检测，需按照相关规定保存。

样品前处理

样品需经过均质化处理，确保微生物分布均匀。对于固体样品，通常使用均质器以适当速度均质1分钟到2分钟；液体样品则需要充分混匀。

DNA提取

DNA提取是PCR检测的关键步骤之一。标准推荐使用商品化的DNA提取试剂盒，严格按照说明书操作，保证提取效率和纯度。

引物设计与选择

引物的设计需针对目标菌株特异性序列，避免非特异性扩增。本标准中使用的引物能够特异性识别沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的保守区域。

PCR反应体系

PCR反应体系包括模板DNA、特异性引物、dNTPs、缓冲液及热稳定DNA聚合酶等成分。标准建议采用优化后的反应条件，如退火温度一般设定为55℃至60℃之间。

扩增程序

扩增程序通常包括初始变性（94℃，3分钟）、30个循环的变性（94℃，30秒）、退火（55℃至60℃，30秒）和延伸（72℃，30秒），最后进行最终延伸（72℃，5分钟）。

结果分析

通过琼脂糖凝胶电泳观察扩增产物，依据预期片段大小判断是否存在目标菌株。阳性对照和阴性对照用于验证实验的有效性和特异性。

注意事项

实验过程中需注意防止污染，所有耗材均需无菌处理，并且整个操作应在洁净环境中完成。此外，每次实验都应设置阳性对照和阴性对照以确保结果准确可靠。

以上内容基于DB22/T 1828-2013标准，旨在提供一个全面而深入的理解框架，帮助使用者更好地掌握此检测方法的核心要点。