DB22T 3601-2023 人参锈腐病菌分子检测 实时荧光定量PCR法

DB22/T 3601-2023《人参锈腐病菌分子检测 实时荧光定量PCR法》是一项专门用于检测人参锈腐病菌的重要技术规范。以下对标准中的关键内容进行详细解读。

范围

该标准规定了使用实时荧光定量PCR方法检测人参锈腐病菌的操作流程，包括样本采集、核酸提取、反应体系建立、扩增条件设定以及结果分析等步骤。适用于人参种植区及科研机构对人参锈腐病菌的快速筛查与诊断。

规范性引用文件

标准中引用了多个相关的国家标准和行业标准，如GB/T 6682关于实验室用水的规定，以及SN/T 1135关于植物病害微生物检测的一般要求。这些引用文件为本标准提供了基础性的技术支持。

术语和定义

明确了“人参锈腐病菌”、“实时荧光定量PCR”等相关专业术语的概念。例如，“人参锈腐病菌”是指引起人参锈腐病的主要致病因子，而“实时荧光定量PCR”是一种通过荧光信号监测DNA扩增过程的技术手段。

样品采集与保存

样品应从疑似感染的人参植株根部取样，确保样本新鲜且无污染。采样后需立即置于冰袋中运输至实验室，并在-70℃条件下长期保存。

核酸提取

采用商业化试剂盒进行基因组DNA提取，操作过程中要注意防止外源DNA污染，保证提取效率达到预期水平。

反应体系构建

构建包含特异性引物、探针、酶及其他必要成分的反应混合液。其中，引物序列设计需基于人参锈腐病菌特有的保守区域，确保检测特异性。

扩增条件设置

设定合适的退火温度（通常为60℃左右）及循环次数（一般为40轮）。此外还需加入ROX染料作为内部参照以校正仪器误差。

结果判定

根据Ct值判断是否存在目标DNA片段。若Ct值小于阈值，则认为样品阳性；反之则为阴性。同时建议设立阳性对照和阴性对照以验证实验可靠性。

注意事项

强调在整个检测过程中严格遵守无菌操作规程，避免交叉污染。另外还应注意定期维护保养仪器设备，确保其处于最佳工作状态。

以上是对DB22/T 3601-2023标准中部分内容的重点解读，希望能帮助使用者更好地理解和应用这项技术规范。