DB15T 2855—2023 马铃薯腐烂茎线虫的qPCR检测技术规程

DB15/T 2855—2023《马铃薯腐烂茎线虫的qPCR检测技术规程》是内蒙古自治区发布的关于马铃薯腐烂茎线虫检测的重要标准。这一规程为快速、准确地检测马铃薯腐烂茎线虫提供了技术支持，对保障农业生产安全具有重要意义。

规程中关键条文之一是样本采集与处理。规程要求采集的样本应包括疑似感染植株的根、茎、叶等部位，并在4℃条件下保存不超过72小时。如果需要长期保存，则需置于-80℃冷冻环境中。这一规定确保了样本的新鲜度和完整性，从而提高检测结果的准确性。

另一重要条文涉及引物设计与合成。规程指出用于qPCR检测的特异性引物序列必须经过严格验证，确保其特异性和灵敏度。引物的设计应当覆盖目标DNA片段的核心区域，并通过BLAST比对确认无非特异性扩增位点。此外，引物的GC含量应在40%-60%之间，长度控制在18-22个碱基范围内。

在仪器设备使用方面，规程强调实时荧光定量PCR仪需定期校准并记录相关参数。每次实验前应对仪器进行空白对照测试，以排除背景干扰。对于试剂盒的选择，规程推荐使用经过国家认证的产品，并严格按照说明书操作。

数据分析部分，规程明确指出Ct值范围应在10-35之间，低于或超出该范围的数据均视为无效。同时要求至少设置三个重复样品，并计算平均Ct值用于后续分析。当目标基因Ct值小于内参基因时，可判定为阳性样本；反之则为阴性。

规程还特别提到，在整个检测流程中必须采取严格的实验室生物安全措施，防止交叉污染。所有接触过样品的耗材都应作为危险废弃物处理，并做好详细的实验记录归档保存。

以上内容是对DB15/T 2855—2023《马铃薯腐烂茎线虫的qPCR检测技术规程》中一些关键条文的深入解读。遵循这些规范能够有效提升检测工作的科学性和可靠性，对于防控马铃薯腐烂茎线虫病害具有重要的指导意义。