THBIQA 0003.7-2024 食品中常见高组胺鱼源性成分检测方法 第7部分：蓝点马鲛 实时荧光

在THBIQA 0003.7-2024《食品中常见高组胺鱼源性成分检测方法 第7部分：蓝点马鲛 实时荧光》中，一个重要的改进是明确了实时荧光定量PCR技术的具体应用流程。与旧版相比，新版标准对样本处理、引物设计以及扩增条件等关键步骤进行了优化，显著提高了检测灵敏度和准确性。

以样本处理为例，旧版标准对于蓝点马鲛鱼组织的预处理描述较为笼统，仅要求去除杂质并研磨成匀浆。而新版则特别强调了在液氮环境下快速冷冻样品的重要性，并推荐使用特定型号的组织捣碎机来制备均质化样本，确保细胞结构完整性和DNA提取效率。此外，新增了关于防止外源污染的操作指南，比如操作台面需预先紫外消毒、实验器具专用且一次性使用等细节。

在引物设计方面，新版标准提供了经过验证的一对特异性引物序列，并给出了其最佳退火温度范围（60℃-62℃）。这不仅减少了实验室自行开发引物可能带来的不确定性，还保证了不同实验室间结果具有可比性。同时，针对某些特殊情况下可能出现非特异性扩增的问题，新版提出了添加熔解曲线分析作为辅助判断手段的方法，即通过观察熔解曲线形状是否符合预期来确认目标产物的真实性。

扩增条件的调整也是新版的一大亮点。旧版标准中规定的循环次数为40次，但实践证明，在达到平台期之前就已能准确反映样品中的组胺含量。因此，新版将总循环数减少至35次，既节省了时间又降低了假阳性风险。另外，对于低浓度样本，建议采用两步法扩增程序——先进行95℃变性10分钟的大循环，再进入常规三步法循环，这样可以有效提高早期信号强度。

这些改进措施共同构成了一个更加科学严谨的检测体系，使得该方法能够更好地服务于食品安全监管工作。