DB15T 2742—2022 羊溶血性曼氏杆菌分离与鉴定操作规程

摘要：本文件规定了羊溶血性曼氏杆菌的分离与鉴定的操作规程，包括样品采集、细菌分离培养、形态学观察、生化特性鉴定及分子生物学鉴定等内容。本文件适用于羊溶血性曼氏杆菌的实验室分离与鉴定工作。
Title：Operational Procedures for Isolation and Identification of Mannheimia Haemolytica in Sheep
中国标准分类号：B 46
国际标准分类号：65.020.30

《羊溶血性曼氏杆菌分离与鉴定操作规程》（DB15/T 2742—2022）是由内蒙古自治区市场监督管理局发布的，旨在规范羊溶血性曼氏杆菌的分离与鉴定工作。以下是一些重要条文的详细解读：

1. **样本采集**：规程要求在采集样本时应选择病死羊或活体病羊的鼻腔、咽喉、肺部等部位。样本采集工具需无菌，避免污染。这一环节的关键在于确保样本的新鲜度和代表性，以提高检测结果的准确性。

2. **样本处理**：样本到达实验室后需要立即进行处理。规程建议将样本接种于营养琼脂培养基上，并置于37℃恒温箱中培养24小时。此步骤的目的在于让细菌有足够的时间生长繁殖，以便后续的分离和鉴定。

3. **细菌分离**：从培养基上挑取单个菌落进行纯化培养。规程强调要使用显微镜观察菌落形态，判断是否为疑似溶血性曼氏杆菌。如果菌落呈现典型的圆形、边缘整齐且具有溶血环，则进一步确认其为该菌种的可能性较大。

4. **生化试验**：包括糖发酵试验、酶活性测试等。例如，利用过氧化氢酶试验来检测细菌是否能够分解过氧化氢产生氧气泡，以此作为初步筛选依据之一。此外还需进行靛基质试验、甲基红试验等项目，通过这些反应特性进一步验证菌株的身份。

5. **分子生物学方法**：采用PCR技术扩增特定基因片段如rpoB基因，然后对产物进行测序分析。这种方法可以提供更精确的数据支持，有助于最终确定菌株的确切种类。

6. **报告撰写**：完成所有实验之后，应当及时整理数据并形成书面报告。报告内容应包含样品信息、实验过程概述、主要发现以及结论部分。特别需要注意的是，在描述结果时要客观公正，不得夸大或隐瞒事实。

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