DB15T 2741—2022 间接ELISA方法检测羊溶血性曼氏杆菌抗体

摘要：本文件规定了间接ELISA方法检测羊溶血性曼氏杆菌抗体的原理、试剂与材料、仪器设备、样品处理、操作步骤、结果判定及注意事项。本文件适用于羊溶血性曼氏杆菌感染的血清学诊断及相关研究。
Title：Indirect ELISA Method for Detecting Antibodies Against Mannheimia Hemolytica in Sheep
中国标准分类号：B46
国际标准分类号：11.220

DB15/T 2741—2022标准规定了使用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测羊溶血性曼氏杆菌抗体的方法。以下是对该标准中一些关键条款的详细解读：

1. **适用范围**：本标准适用于内蒙古地区羊群中溶血性曼氏杆菌抗体的检测。这一限定明确了标准的应用地域和目标群体，确保检测结果具有区域代表性。

2. **试剂与材料**：标准要求使用特定的抗原包被板、酶标二抗以及底物溶液等。这些试剂的选择直接影响检测结果的准确性和可靠性，因此需要严格按照规定采购和储存。

3. **样品采集与处理**：在样品采集过程中，需注意无菌操作以避免样本污染。血清分离后应尽快检测或按要求保存，这一步骤对于保持样本活性至关重要。

4. **实验步骤**：

- 抗体结合：将稀释后的待测血清加入到已包被好抗原的微孔板中，在一定温度下孵育。

- 洗涤：使用专用洗涤液多次清洗微孔板，去除未结合物质。

- 酶标二抗反应：加入酶标二抗继续孵育，形成酶标记复合物。

- 显色：添加显色剂后避光显色，通过比色计读取吸光度值。

5. **结果判定**：根据空白对照组和阳性对照组的吸光度值来判断样品是否呈阳性。通常情况下，样品的吸光度值高于临界值则判定为阳性。

6. **质量控制**：每次试验都必须设立阴性和阳性对照，同时进行重复性测试，确保数据的一致性和准确性。

7. **注意事项**：实验人员需接受专业培训，并严格遵守实验室安全规程。此外，所有使用的设备均需定期校准维护。

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