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摘要:本文件规定了间接ELISA方法检测羊溶血性曼氏杆菌抗体的原理、试剂与材料、仪器设备、样品处理、操作步骤、结果判定及注意事项。本文件适用于羊溶血性曼氏杆菌感染的血清学诊断及相关研究。
Title:Indirect ELISA Method for Detecting Antibodies Against Mannheimia Hemolytica in Sheep
中国标准分类号:B46
国际标准分类号:11.220
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拓展解读
DB15/T 2741—2022标准规定了使用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测羊溶血性曼氏杆菌抗体的方法。以下是对该标准中一些关键条款的详细解读:
1. 适用范围:本标准适用于内蒙古地区羊群中溶血性曼氏杆菌抗体的检测。这一限定明确了标准的应用地域和目标群体,确保检测结果具有区域代表性。
2. 试剂与材料:标准要求使用特定的抗原包被板、酶标二抗以及底物溶液等。这些试剂的选择直接影响检测结果的准确性和可靠性,因此需要严格按照规定采购和储存。
3. 样品采集与处理:在样品采集过程中,需注意无菌操作以避免样本污染。血清分离后应尽快检测或按要求保存,这一步骤对于保持样本活性至关重要。
4. 实验步骤:
- 抗体结合:将稀释后的待测血清加入到已包被好抗原的微孔板中,在一定温度下孵育。
- 洗涤:使用专用洗涤液多次清洗微孔板,去除未结合物质。
- 酶标二抗反应:加入酶标二抗继续孵育,形成酶标记复合物。
- 显色:添加显色剂后避光显色,通过比色计读取吸光度值。
5. 结果判定:根据空白对照组和阳性对照组的吸光度值来判断样品是否呈阳性。通常情况下,样品的吸光度值高于临界值则判定为阳性。
6. 质量控制:每次试验都必须设立阴性和阳性对照,同时进行重复性测试,确保数据的一致性和准确性。
7. 注意事项:实验人员需接受专业培训,并严格遵守实验室安全规程。此外,所有使用的设备均需定期校准维护。
以上内容涵盖了从试剂准备到最终结果分析的主要流程,旨在帮助相关人员正确理解和执行DB15/T 2741—2022标准,从而获得可靠的检测结果。