DB65T 4495-2022 牛布鲁氏菌A19-△VirB12分子标记疫苗鉴别诊断方法

《牛布鲁氏菌A19-△VirB12分子标记疫苗的鉴别诊断方法》（DB65/T 4495-2022）是一项新疆维吾尔自治区地方标准，旨在规范和指导牛布鲁氏菌病防控中对A19-△VirB12疫苗株的检测与鉴别。这项标准适用于养殖场、实验室及疾病预防控制机构，对于确保畜牧业健康发展具有重要意义。

标准的核心内容

# 一、适用范围

该标准适用于牛布鲁氏菌A19-△VirB12分子标记疫苗株的检测与鉴别，包括但不限于活疫苗和灭活疫苗。这为疫苗的质量控制提供了明确的技术依据。

# 二、术语和定义

1. A19-△VirB12疫苗株：指经过基因编辑缺失VirB12功能基因后的A19疫苗株。

2. 分子标记：特异性DNA序列，用于区分不同布鲁氏菌株。

# 三、技术要求

1. 样本采集

- 样本应从健康牛群或疑似感染牛群中采集，包括血液、乳汁、组织等。

- 采集时需注意无菌操作，防止污染。

2. 核酸提取

- 使用高效稳定的核酸提取试剂盒，确保提取的DNA质量高、纯度好。

- 提取过程中应严格遵守操作规程，避免外源DNA污染。

3. PCR扩增

- 设计特异性引物，针对A19-△VirB12疫苗株特有的VirB12基因缺失位点进行扩增。

- PCR反应体系应优化，确保扩增效率和特异性。

4. 结果判定

- 若扩增出预期大小的目标片段，则判定为阳性，即存在A19-△VirB12疫苗株。

- 若未扩增出目标片段，则判定为阴性。

# 四、质量控制

- 实验室应建立完善的质量管理体系，定期对设备进行校准和维护。

- 每次实验均需设置阳性对照和阴性对照，以验证实验的有效性和可靠性。

# 五、安全措施

- 实验人员在操作过程中应穿戴适当的防护装备，如手套、口罩和实验服。

- 所有涉及病原微生物的操作应在生物安全柜内完成，废弃物需按照相关规定处理。

重要条文解读

1. 样本采集的重要性

- 正确的样本采集是准确检测的基础。不同类型的样本可能反映出不同的感染状态，因此选择合适的采样部位和时间至关重要。

2. 引物设计的关键性

- 引物的设计直接影响PCR扩增的成功率。特异性引物能够有效地区分目标菌株与其他布鲁氏菌株，从而提高检测的准确性。

3. 结果判读的标准

- 结果判读时需结合多个因素综合考虑，如扩增曲线形状、熔解曲线分析等。单一指标不足以做出最终结论。

实施建议

- 各级畜牧兽医部门应加强对该标准的学习和应用，确保基层工作人员熟练掌握相关技术。

- 定期举办培训班和技术交流会，提升从业人员的专业技能。

- 加强与其他地区和国家的合作，共享先进的检测技术和经验。

通过严格执行DB65/T 4495-2022标准，可以有效地监测和管理牛布鲁氏菌病，保护动物健康，保障食品安全，促进畜牧业持续健康发展。