DB65T 4495-2022 牛布鲁氏菌A19-△VirB12分子标记疫苗鉴别诊断方法

摘要：本文件规定了牛布鲁氏菌A19-△VirB12分子标记疫苗的鉴别诊断方法，包括样品采集、DNA提取、PCR扩增及结果分析。本文件适用于牛布鲁氏菌疫苗株与野毒株的鉴别诊断及相关研究工作。
Title：Identification Method of Bovine Brucella A19-△VirB12 Molecular Marker Vaccine
中国标准分类号：B46
国际标准分类号：67.120

《牛布鲁氏菌A19-△VirB12分子标记疫苗的鉴别诊断方法》（DB65/T 4495-2022）是一项新疆维吾尔自治区地方标准，旨在规范和指导牛布鲁氏菌病防控中对A19-△VirB12疫苗株的检测与鉴别。这项标准适用于养殖场、实验室及疾病预防控制机构，对于确保畜牧业健康发展具有重要意义。

### 标准的核心内容

#### 一、适用范围

该标准适用于牛布鲁氏菌A19-△VirB12分子标记疫苗株的检测与鉴别，包括但不限于活疫苗和灭活疫苗。这为疫苗的质量控制提供了明确的技术依据。

#### 二、术语和定义

1. **A19-△VirB12疫苗株**：指经过基因编辑缺失VirB12功能基因后的A19疫苗株。

2. **分子标记**：特异性DNA序列，用于区分不同布鲁氏菌株。

#### 三、技术要求

1. **样本采集**

- 样本应从健康牛群或疑似感染牛群中采集，包括血液、乳汁、组织等。

- 采集时需注意无菌操作，防止污染。

2. **核酸提取**

- 使用高效稳定的核酸提取试剂盒，确保提取的DNA质量高、纯度好。

- 提取过程中应严格遵守操作规程，避免外源DNA污染。

3. **PCR扩增**

- 设计特异性引物，针对A19-△VirB12疫苗株特有的VirB12基因缺失位点进行扩增。

- PCR反应体系应优化，确保扩增效率和特异性。

4. **结果判定**

- 若扩增出预期大小的目标片段，则判定为阳性，即存在A19-△VirB12疫苗株。

- 若未扩增出目标片段，则判定为阴性。

#### 四、质量控制

- 实验室应建立完善的质量管理体系，定期对设备进行校准和维护。

- 每次实验均需设置阳性对照和阴性对照，以验证实验的有效性和可靠性。

#### 五、安全措施

- 实验人员在操作过程中应穿戴适当的防护装备，如手套、口罩和实验服。

- 所有涉及病原微生物的操作应在生物安全柜内完成，废弃物需按照相关规定处理。

### 重要条文解读

1. **样本采集的重要性**

- 正确的样本采集是准确检测的基础。不同类型的样本可能反映出不同的感染状态，因此选择合适的采样部位和时间至关重要。

2. **引物设计的关键性**

- 引物的设计直接影响PCR扩增的成功率。特异性引物能够有效地区分目标菌株与其他布鲁氏菌株，从而提高检测的准确性。

3. **结果判读的标准**

- 结果判读时需结合多个因素综合考虑，如扩增曲线形状、熔解曲线分析等。单一指标不足以做出最终结论。

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