TCRHA 059-2024 基质辅助激光解吸电离飞行时间核酸质谱法体细胞突变检测通则

本文将聚焦于TCRHA 059-2024与旧版标准在样本制备方面的关键差异，并详细解析其应用方法。

在旧版标准中，样本制备环节要求使用机械研磨法对组织样本进行预处理，这种方法虽然能保证样本均一性，但操作复杂且耗时较长。新版标准对此进行了优化，推荐采用酶消化结合超声波破碎的技术路线。这一改变主要体现在以下几点：

首先，在酶选择上，新版标准建议使用蛋白酶K和RNA酶抑制剂的组合。蛋白酶K能够有效分解蛋白质结构，使核酸充分释放；RNA酶抑制剂则可以保护RNA分子不被降解，确保后续检测结果的准确性。

其次，超声波破碎步骤的时间控制至关重要。根据实验数据，当超声时间为10分钟、间歇时间为30秒时，可以获得最佳的细胞裂解效果。此参数设置既能高效破碎细胞膜，又避免了过度破碎导致的核酸片段化问题。

再者，样本制备过程中还需注意温度管理。建议在整个酶消化和超声破碎阶段维持在50℃左右的恒温环境，这样既有利于酶活性发挥，也能减少核酸降解风险。

通过以上改进措施，新版标准显著提升了样本制备效率，缩短了整体检测周期，同时保持了较高的数据可靠性。这种技术路线特别适用于高通量检测场景，为临床研究提供了更有力的支持。