DB22T 3333-2022 杂交大豆RN型“三系”恢保快速鉴定规程

《DB22/T 3333-2022 杂交大豆RN型“三系”恢保快速鉴定规程》是吉林省发布的关于杂交大豆恢复系、保持系快速鉴定的技术规范。该标准适用于快速鉴别杂交大豆的恢复系和保持系，为育种工作提供技术支持。

标准中规定了采用分子标记技术对杂交大豆“三系”材料进行鉴定的方法。其中重要条文包括：

1. 样品采集：要求取新鲜叶片或幼苗作为检测样本，确保样本量充足且无污染。

2. DNA提取：推荐使用CTAB法提取高质量基因组DNA，提取过程中要注意防止DNA降解。

3. PCR扩增体系：设定反应总体积25μL，包含10×PCR缓冲液2.5μL，dNTPs 2.0μL，正向引物10μmol/L 1.0μL，反向引物10μmol/L 1.0μL，Taq酶0.2μL，模板DNA 100ng，加超纯水补足体积至25μL。

4. 扩增程序：设置94℃预变性5分钟；然后94℃变性30秒，58℃退火30秒，72℃延伸45秒，共35个循环；最后72℃延伸10分钟。

5. 电泳检测：将扩增产物在6%非变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离，电压60V恒压电泳2小时，银染显色观察结果。

6. 结果判定：根据电泳图谱中特异性条带的存在与否判断样品类型。恢复系应具有特定条带A，保持系应具有特定条带B，若两者均无则为正常大豆品种。

7. 注意事项：实验应在无菌条件下操作，避免交叉污染；所有试剂需现配现用，确保实验准确性。

以上条文明确了从样本准备到最终鉴定的全过程，为高效准确地开展杂交大豆“三系”材料的快速鉴定提供了科学依据和技术保障。