DB32T 3762.14-2021 新型冠状病毒检测技术规范 第14部分：N亚基因组荧光PCR检测程序

摘要：本文件规定了N亚基因组荧光PCR检测新型冠状病毒的技术要求、操作步骤、质量控制和结果判定。本文件适用于医疗机构、疾控中心及相关实验室进行新型冠状病毒的N亚基因组荧光PCR检测。
Title：Technical Specification for Novel Coronavirus Testing - Part 14: Fluorescent PCR Detection Procedure for N Subgenomic
中国标准分类号：C46
国际标准分类号：11.100.99

DB32/T 3762.14-2021《新型冠状病毒检测技术规范 第14部分：N亚基因组荧光PCR检测程序》是一项专门针对新冠病毒N亚基因组核酸检测的技术规范。以下是对该标准中一些重要条文的详细解读：

### 样品采集与处理

**5.1 样品类型**

标准规定了主要的样本类型包括鼻咽拭子、口咽拭子以及痰液等。这些样本的选择应根据患者的临床症状和流行病学史来决定，确保样本具有代表性。

**5.2 样本保存与运输**

样本应在采集后立即放入专用的病毒保存液中，并在4°C条件下短期保存或-70°C长期保存。运输过程中需使用干冰或其他适当的冷链措施以维持低温环境，防止样本降解影响检测结果准确性。

### 实验室准备

**6.1 实验室分区**

实验室应按照生物安全要求划分为试剂准备区、标本制备区和扩增检测区三个独立区域。每个区域内设备配置需满足相应功能需求，避免交叉污染。

**6.2 试剂准备**

所有用于实验的试剂都必须经过验证合格后方可使用。试剂盒内的引物探针设计需覆盖新冠病毒N基因序列保守区段，确保能够有效检出目标病毒。

### 检测步骤

**7.1 核酸提取**

采用自动化核酸提取仪进行操作可以提高效率并减少人为误差。对于不同类型的样本可能需要调整特定的提取参数如裂解时间、洗脱体积等。

**7.2 荧光定量PCR扩增**

反应体系中加入特异性引物及荧光标记探针后，在热循环仪上完成预变性、退火延伸等多个阶段的循环过程。设置合适的熔解曲线分析有助于判断是否存在非特异性扩增产物。

**7.3 结果判读**

Ct值低于设定阈值时视为阳性；若高于此值但接近则需重复测试确认。同时还需要结合内参基因表达水平作为对照参考，进一步验证样本质量及实验可靠性。

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