TCVMA 168-2024 鸡传染性支气管炎病毒QX型荧光RT-PCR检测方法

鸡传染性支气管炎病毒（IBV）QX型荧光RT-PCR检测方法在新版标准TCVMA 168-2024中进行了多项修订和优化。本文将聚焦于“内源性对照”的引入及其应用，这是新旧版本中的显著差异之一。

在旧版标准中，由于缺乏有效的内源性对照，检测结果可能受到样本质量、抑制物等因素的影响，导致假阴性或假阳性。而在TCVMA 168-2024中，新增了内源性对照的要求，这为检测提供了更高的准确性和可靠性。

内源性对照是一种与目标基因共存于样本中的参考物质，用于监测整个提取和扩增过程的有效性。在实际操作中，首先需要选择合适的内源性对照序列，通常会选择鸡基因组中的保守序列，如β-actin基因。然后设计特异性引物和探针，确保其与目标基因的扩增条件一致。

在实验过程中，内源性对照应与待测样本同时进行核酸提取和扩增反应。通过比较内源性对照的Ct值与目标基因的Ct值，可以评估样本质量和反应体系的一致性。如果内源性对照未能成功扩增，则表明样本可能存在抑制物或其他问题，需重新处理样本后再进行检测。

这种改进对于提高检测结果的可信度至关重要，特别是在临床诊断中，能够有效避免因样本质量问题导致的误判。例如，在一次实际检测中，某实验室发现部分样本的目标基因未能扩增，但内源性对照却正常扩增，经过复检后确认这些样本确实含有病毒RNA，只是提取效率较低。

因此，内源性对照的引入不仅增强了检测方法的科学性，也为实验室的质量控制提供了有力支持。在使用该方法时，务必严格按照标准要求操作，确保内源性对照的正确设置和分析，以获得可靠的结果。