DB35T 1992-2021 番鸭细小病毒和鹅细小病毒双重实时荧光定量 PCR 鉴别诊断技术

摘要：本文件规定了番鸭细小病毒和鹅细小病毒双重实时荧光定量PCR鉴别诊断技术的原理、试剂与材料、仪器设备、样品处理、检测方法、结果判定及检测报告。本文件适用于番鸭细小病毒和鹅细小病毒的检测与鉴别诊断。
Title：Dual Real-time Fluorescent Quantitative PCR Differential Diagnostic Technology for Muscovy Duck Parvovirus and Goose Parvovirus
中国标准分类号：B46
国际标准分类号：07.100.30

福建省地方标准《番鸭细小病毒和鹅细小病毒双重实时荧光定量PCR鉴别诊断技术》（DB35/T 1992-2021）是一项重要的检测方法标准，为番鸭和鹅这两种禽类的细小病毒感染提供了快速、准确的诊断手段。以下将选取部分关键条文进行详细解读。

### 范围

标准规定了使用双重实时荧光定量PCR技术对番鸭细小病毒（MDPV）和鹅细小病毒（GSPV）进行检测的方法。该方法适用于临床样本如泄殖腔拭子、血液等的检测，是目前较为先进的分子生物学检测手段之一。

### 规范性引用文件

本标准引用了多个国内外相关标准和技术规范，包括GB/T 6682关于实验室用水的规定以及SN/T 1117关于核酸提取的相关要求。这些引用文件确保了实验过程中的试剂质量与操作规范性。

### 术语和定义

- **双重实时荧光定量PCR**：指在同一反应体系内同时扩增两种目标基因片段，并通过荧光信号监测其扩增情况的技术。

- **阳性对照品**：含有已知浓度的目标DNA序列的标准物质，用于验证实验系统的有效性。

- **阴性对照品**：不含任何目标DNA序列的样品，用于排除非特异性扩增的可能性。

### 技术要求

1. **引物设计**

引物的设计需遵循特定原则以保证特异性和灵敏度。例如，引物长度一般在18-25个碱基之间，GC含量适中（40%-60%），并且避免形成二级结构。

2. **反应体系组成**

- 每次反应需要包含模板DNA、正向引物、反向引物、探针、dNTPs、Mg²⁺离子及热启动酶。

- 反应体积通常设定为20μL或更高，具体参数应根据仪器型号调整。

3. **反应条件**

反应程序一般包括预变性、退火延伸等多个步骤，每个阶段的时间和温度设置直接影响结果准确性。例如，预变性的温度通常设为95℃持续3分钟。

4. **结果判断**

- Ct值小于阈值时判定为阳性；

- 若两个对照均正常且无非特异性扩增，则可认为实验有效。

### 结果分析

结果分析部分强调了数据处理的重要性，建议采用软件绘制标准曲线来计算样品中病毒载量。同时指出，当出现可疑结果时应重复实验并结合其他检测方法综合判断。

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