DB65T 4391-2021 布鲁氏菌病A19株与感染株PCR鉴别法

摘要：本文件规定了布鲁氏菌病A19株与感染株的PCR鉴别方法，包括样品采集、DNA提取、PCR扩增及结果分析等内容。本文件适用于布鲁氏菌病A19株疫苗接种与自然感染的鉴别诊断及相关研究工作。
Title：Brucellosis A19 Strain and Infectious Strain PCR Differentiation Method
中国标准分类号：C46
国际标准分类号：11.020

《DB65/T 4391-2021布鲁氏菌病A19株与感染株PCR鉴别法》是一项新疆维吾尔自治区地方标准，规定了利用PCR技术对布鲁氏菌疫苗株（A19株）和感染株进行鉴别的方法。以下是对该标准中重要条文的详细解读。

首先，在范围部分明确指出本标准适用于牛羊布鲁氏菌病疫苗株A19株与自然感染株的PCR鉴别。这表明该标准主要针对养殖业中常见的牛羊布鲁氏菌病防控需求制定。

在规范性引用文件部分，标准列出了多个相关国家标准和行业标准，如GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法等，这些文件为开展PCR检测提供了必要的技术支持。

术语和定义部分给出了布鲁氏菌病、疫苗株A19株、感染株以及PCR等关键概念的解释。其中特别强调了疫苗株A19株是经过人工减毒处理后用于预防布鲁氏菌病的活疫苗，而感染株则是引起疾病传播的野毒株。

样品采集与保存章节要求样品应来源于健康或疑似患病动物的血液、组织或其他分泌物，并且需按照无菌操作规程进行采集并及时送检。样本应在-70℃条件下长期保存以保证DNA完整性。

试剂盒选择与使用部分建议采用特异性高、灵敏度好的商品化试剂盒，并严格按照说明书操作。同时注意定期做阳性对照和阴性对照实验来验证试剂盒性能。

提取模板DNA时应遵循高效低污染的原则，推荐使用商业化试剂盒完成此过程。确保获得高质量的模板DNA对于后续PCR扩增至关重要。

PCR扩增体系建立时需精确控制反应体积、引物浓度及退火温度等因素。根据标准提供的参数设置条件，可以有效区分疫苗株与感染株特异性的核酸序列。

最后结果判定依据扩增产物大小判断是否为疫苗株或者感染株。如果检测到预期大小的目的片段，则判定为感染株；反之则认为是疫苗株。此外还需结合临床症状和其他实验室检查综合评估。

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