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摘要:本文件规定了水牛体细胞核移植技术的操作流程、技术要求及质量控制方法。本文件适用于水牛体细胞核移植技术的研究、生产和应用。
Title:Technical Operation Specifications for Water Buffalo Somatic Cell Nuclear Transfer
中国标准分类号:B61
国际标准分类号:65.020
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拓展解读
DB45/T 2312-2021《水牛体细胞核移植技术操作规程》是一项广西壮族自治区地方标准,为规范水牛体细胞核移植技术的操作流程提供了详细的指导。以下是对该标准中一些关键条款的深入解读。
样品采集与处理
标准指出,在进行水牛体细胞核移植前,需从供体水牛耳缘组织或皮肤组织中提取细胞样本。要求使用的组织剪、镊子等工具必须经过严格灭菌处理,并在无菌条件下操作。此外,样品采集后应立即放入含有培养基的培养皿中,确保细胞活性不受影响。
细胞培养与传代
关于细胞培养部分,标准强调了使用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基,并在38.5℃、5%CO2环境下培养。初次接种时细胞密度控制在每平方厘米1×10^4个细胞左右,每2-3天更换一次新鲜培养基直至细胞达到融合状态。当细胞生长至第3代时即可用于后续实验,这一步骤对于保证移植成功率至关重要。
胚胎操作
在胚胎操作环节,标准规定了如何正确分离卵母细胞透明带以及去除多余细胞质的方法。具体而言,采用蛋白酶K处理后的显微操作针轻轻敲击卵母细胞表面以达到去透明带的目的;而去除多余细胞质则需要借助微型吸管精确吸取。这些操作均需在显微镜下完成,且整个过程要保持低温(通常为30-37℃)。
移植程序
最后,在实际移植过程中,标准建议选择健康状况良好的受体母牛作为移植对象,并在其发情周期的最佳时间点实施手术。移植前应对受体母牛进行全面体检,确认其符合接受移植的标准。移植完成后还需密切观察母牛的身体反应,一旦发现异常情况应及时采取措施。
以上便是对DB45/T 2312-2021中几个核心内容的深度解析。遵循此标准能够有效提高水牛体细胞核移植的成功率,促进相关科研工作的顺利开展。