DB15T 2188—2021 农杆菌介导油菜黑胫病菌（Leptosphaeria biglobosa）遗传转化技术规程

摘要：本文件规定了农杆菌介导油菜黑胫病菌（Leptosphaeria biglobosa）遗传转化的技术要求、操作步骤和验证方法。本文件适用于油菜黑胫病菌的遗传转化研究及相关应用。
Title：Technical Regulations for Agrobacterium-mediated Genetic Transformation of Leptosphaeria biglobosa (Oilseed Rape Blackleg Pathogen)
中国标准分类号：B 61
国际标准分类号：65.020

DB15/T 2188—2021《农杆菌介导油菜黑胫病菌遗传转化技术规程》是一项重要的地方标准，它为通过农杆菌介导的方法实现油菜黑胫病菌的遗传转化提供了系统的操作指南。以下将从该标准的重要条文中进行详细解读。

首先，在“范围”部分明确指出本标准适用于以农杆菌介导的方式对油菜黑胫病菌进行遗传转化的研究和应用。这一规定确立了标准的应用领域，确保所有从事相关工作的人员都能遵循统一的技术规范。

其次，“术语和定义”中对关键概念进行了界定，如“农杆菌介导”、“油菜黑胫病菌”等，这些定义为后续具体步骤的理解奠定了基础。例如，“农杆菌介导”被描述为利用农杆菌作为载体将外源DNA导入宿主细胞的过程，而“油菜黑胫病菌”则是引起油菜黑胫病的主要病原体之一。

在“材料与设备”章节里，标准要求使用特定类型的培养基、抗生素以及实验器材，并且强调了无菌操作的重要性。比如，MS培养基是常用的植物组织培养基，而卡那霉素或潮霉素则常用于筛选成功转化的菌株。此外，还应配备超净工作台、高压灭菌锅等基本设备来保证实验环境的清洁度。

接着，“方法步骤”部分详细列出了从菌种准备到最终鉴定的全过程。其中包括菌种活化、感染液制备、共培养条件设定、筛选压力设置等多个环节。特别是关于共培养时间的选择，标准建议控制在3天左右，这样既能促进基因转移又不会导致过多死亡率。

另外，“结果评价”部分给出了如何判断是否获得成功转化的具体指标。通常会检测转化子中是否存在目的基因，并通过PCR扩增验证其表达情况。同时还需要观察表型变化，如抗性增强与否等。

最后，“注意事项”提醒使用者注意安全防护措施和个人卫生习惯，避免交叉污染。并且鼓励持续改进现有流程，提高效率与准确性。

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