DB37T 4362—2021 流感病毒与犬瘟热病毒双重荧光RT-PCR检测方法

DB37/T 4362—2021《流感病毒与犬瘟热病毒双重荧光RT-PCR检测方法》是一项山东省地方标准，主要用于指导实验室对流感病毒和犬瘟热病毒进行快速、准确的检测。这项标准适用于动物疫病防控机构、科研单位以及相关企业等场景下的病毒检测工作。以下将对标准中的几个关键条款进行详细解读。

范围

该标准规定了使用双重荧光RT-PCR技术同时检测甲型流感病毒和犬瘟热病毒的方法。这意味着在同一个反应体系内可以完成两种不同病毒的检测，提高了效率并减少了操作步骤。

原理

双重荧光RT-PCR基于逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）原理，在一个反应管中加入特异性引物和探针分别针对甲型流感病毒和犬瘟热病毒的目标序列。通过荧光信号的变化来判断是否存在这两种病毒的存在。

样品采集与处理

样品应来源于疑似感染动物，如鼻咽拭子或血液样本。采集后需立即置于冰上，并尽快送至实验室进行处理。样本处理过程中要注意避免污染，确保结果准确性。

试剂与设备

标准中列出了所需的主要试剂包括反转录酶、DNA聚合酶、特异性引物及探针等。同时要求使用的仪器设备能够支持实时荧光定量PCR操作，并且具备良好的温控性能。

操作步骤

1. 核酸提取：采用适当的商业化试剂盒提取样本中的RNA。

2. RT-PCR反应体系配置：按照说明书配制反应混合液，加入相应的引物、探针及酶。

3. 扩增条件设置：设定合适的退火温度、延伸时间等参数。

4. 数据分析：根据获得的荧光曲线图判断是否阳性，Ct值小于设定阈值则视为阳性。

结果判定

如果目标基因片段被成功扩增，则会在特定波长下产生荧光信号。对于甲型流感病毒和犬瘟热病毒而言，它们各自具有独特的荧光标记，因此可以通过观察不同颜色的荧光强度来区分两者。

注意事项

执行本标准时必须严格遵守无菌操作规程以防止交叉污染；此外还需定期校准仪器设备保证其正常工作状态；最后还应对实验人员进行专业培训，确保他们熟悉整个检测流程。

总之，《流感病毒与犬瘟热病毒双重荧光RT-PCR检测方法》为快速准确地筛查这两种常见于家畜中的病毒提供了一套科学合理的技术方案。它不仅有助于提高工作效率，而且对于控制疾病传播具有重要意义。