DB13T 5345-2021 猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型二重PCR检测方法

摘要：本文件规定了猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型二重PCR检测的原理、试剂与材料、仪器设备、样品处理、检测步骤、结果分析及注意事项。本文件适用于猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的实验室检测与诊断。
Title：Detection Method of Dual PCR for Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus and Porcine Circovirus Type 2
中国标准分类号：B46
国际标准分类号：11.220

DB13T 5345-2021标准规定了猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪圆环病毒2型（PCV2）的二重PCR检测方法。以下是一些关键条文的解读：

1. **适用范围**：该标准适用于猪场中PRRSV和PCV2的检测。这意味着此方法可以用于诊断这两种病毒在猪群中的感染情况，帮助养殖业者及时发现并控制疾病传播。

2. **样本采集**：标准要求使用鼻拭子、咽喉拭子或肺组织作为检测样本。正确的样本采集对于确保检测结果的准确性至关重要。例如，鼻拭子应从鼻腔深处轻轻擦拭获取。

3. **试剂盒选择**：需选用经过验证的试剂盒，确保其对PRRSV和PCV2具有特异性。这一步骤强调了试剂的质量控制，避免因试剂问题导致假阳性或假阴性结果。

4. **核酸提取**：采用适当的核酸提取方法是保证检测灵敏度的关键。标准建议使用商业化试剂盒进行核酸提取，并注意操作过程中的污染预防。

5. **反应体系建立**：包括引物浓度、探针浓度以及反应条件如退火温度等都需要严格设定。这些参数直接影响PCR扩增的效果，因此必须按照说明书精确设置。

6. **扩增程序**：通常包括预变性、循环扩增（变性、退火、延伸）及最终延伸三个阶段。每个阶段的时间和温度都需严格按照规定执行以获得最佳扩增效果。

7. **结果分析**：通过观察荧光信号来判断是否检测到目标基因。如果Ct值小于阈值，则认为样品呈阳性；反之则为阴性。同时还需要做空白对照和阳性对照以验证实验的有效性。

8. **质量控制**：在整个检测过程中需要设立严格的质控措施，比如使用内参基因监测样本质量和反应效率，定期校准仪器设备等。

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