DB32T 3925-2020 白斑综合征病 (WSSV)环介导等温扩增(LAMP)检测技术规范

摘要：本文件规定了白斑综合征病毒（WSSV）环介导等温扩增（LAMP）检测的技术要求、操作步骤、结果判定和注意事项。本文件适用于水产养殖中白斑综合征病毒的快速检测。
Title：Technical Specification for Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) Detection of White Spot Syndrome Virus (WSSV)
中国标准分类号：B46
国际标准分类号：65.020

DB32/T 3925-2020《白斑综合征病 (WSSV) 环介导等温扩增(LAMP)检测技术规范》是一项针对白斑综合征病毒(WSSV)检测的重要地方标准。以下选取了几个关键条文进行详细解读：

1. **适用范围**：该标准适用于虾类中白斑综合征病毒的LAMP检测。这一规定明确了标准的应用领域，确保检测方法适用于目标生物和病原体。

2. **术语和定义**：标准中对“环介导等温扩增”、“特异性”、“灵敏度”等术语进行了明确界定。例如，“特异性”被定义为在存在其他非靶标DNA时，仅能正确识别并扩增靶标DNA的能力。这有助于实验人员准确理解术语含义，避免因概念模糊导致的操作失误。

3. **试剂与材料**：标准要求使用经过验证的特异性引物、探针及阳性对照品。同时强调所有试剂需在有效期内使用，并按说明书储存。此条款保障了实验结果的可靠性，防止因试剂质量问题影响检测准确性。

4. **样品采集与处理**：规定了从活体虾或冻存样本中提取DNA的具体步骤，包括组织匀浆、DNA提取等过程。特别指出样品应在4℃条件下保存不超过24小时，长期则需置于-80℃。这些细节操作对于保持样品活性至关重要。

5. **反应体系建立**：标准详细描述了LAMP反应所需的组分浓度，如Bst DNA聚合酶、Mg²⁺离子浓度等，并给出了推荐的反应体积。此外还建议采用水浴锅或恒温金属浴设备控制温度在63℃±1℃范围内持续60分钟。这样的设置能够保证最佳反应条件。

6. **结果判定**：根据肉眼观察到的颜色变化来判断结果，若加入荧光染料后观察到绿色荧光，则判定为阳性；无明显颜色改变则视为阴性。另外还需通过电泳进一步确认扩增产物大小是否符合预期。这种双重验证机制提高了检测结果的可信度。

7. **质量控制**：强调每次试验都应包含阳性对照、阴性对照以及空白对照，以监测整个流程的有效性和稳定性。同时鼓励定期进行内部质控，比如使用已知浓度的标准品进行重复测试。

登陆阅读剩余内容

登陆 注册