DB15T 2044—2020 农杆菌介导甜菜遗传转化技术规程

《DB15T 2044—2020农杆菌介导甜菜遗传转化技术规程》是内蒙古自治区发布的关于甜菜遗传转化的重要地方标准。该标准对农杆菌介导的甜菜遗传转化操作进行了规范，为提高甜菜育种效率提供了技术支持。以下将选取其中的关键条款进行深入解读。

首先，在材料准备方面，标准要求选择生长健壮、无病虫害的甜菜外植体作为受体材料，并规定了外植体的大小应控制在0.5-1.0厘米之间。这一规定旨在确保外植体具有较强的再生能力，同时减少污染风险。此外，标准还强调了培养基的选择和配制，要求使用适合甜菜组织培养的MS基本培养基，并根据实验需要添加适宜浓度的植物激素。

其次，在农杆菌菌液制备环节，标准明确规定了菌液浓度和共培养时间。具体而言，菌液OD600值应保持在0.6-0.8范围内，共培养时间为15-30分钟。这样的设置可以保证农杆菌有效侵染外植体，同时避免过度侵染导致细胞损伤。另外，标准还特别提到要严格控制预培养和共培养条件下的温度与湿度，以创造有利于转化发生的环境。

再者，在筛选和再生阶段，标准提出了具体的筛选剂浓度及更换频率。例如，筛选剂浓度通常设定为50-100毫克/升，每隔7-14天更换一次培养基。这样做既能有效抑制非转化细胞生长，又不会对外植体造成不可逆伤害。此外，标准还建议采用逐步降低筛选剂浓度的方法来促进再生植株的形成。

最后，在遗传稳定性检测部分，标准指出需通过PCR扩增或Southern blotting等分子生物学手段验证目标基因是否成功整合到甜菜基因组中。并且强调至少要选取三个独立转化事件进行分析，以确保结果可靠性和重复性。同时，还要求对转基因植株后代进行遗传稳定性评估，确认其能够稳定遗传。

综上所述，《DB15T 2044—2020农杆菌介导甜菜遗传转化技术规程》从材料准备、菌液制备、筛选再生到遗传稳定性检测等多个环节给出了详细的指导，为开展高效精准的甜菜遗传转化研究奠定了坚实基础。这些规定的实施不仅有助于提升甜菜育种水平，也为其他作物的遗传改良提供了参考依据。