DB15T 2033—2020 乳酸菌胞外多糖的分离纯化与鉴定技术规程

《DB15/T 2033—2020乳酸菌胞外多糖的分离纯化与鉴定技术规程》是内蒙古自治区发布的关于乳酸菌胞外多糖研究的技术规范。以下选取部分重要条文进行详细解读。

在“4.1样品采集”中规定，采集的乳酸菌样本应来源于健康动物或植物原料，并要求在无菌条件下操作。这一规定旨在确保所采集样本的纯净性，避免外界污染对实验结果造成干扰。

“4.2预处理”部分指出，将乳酸菌培养物离心后取上清液，然后用截留分子量为5000 Da的超滤膜浓缩。此步骤的关键在于选择合适的超滤膜截留分子量，过大会导致大分子物质流失影响后续分析，过小则可能使目标产物浓度过高而难以处理。

“5.1提取”明确采用乙醇沉淀法提取胞外多糖，具体操作为向浓缩后的上清液加入95%体积分数的乙醇使其终浓度达到70%，静置12 h后离心收集沉淀。这种方法简单易行且成本低廉，在实际应用中需注意控制乙醇用量及静置时间以获得最佳提取效果。

“6.2纯化”采用DEAE-纤维素柱层析法对粗提物进行纯化。首先用蒸馏水洗脱去除杂质，接着用0.2 mol/L NaCl溶液洗脱目标组分，最后用0.5 mol/L NaCl溶液洗脱保留下来的成分。该方法能够有效分离不同分子量的多糖组分，提高纯度。

“7.1定性鉴定”中提到可通过苯酚-硫酸法测定总糖含量来初步判断是否存在胞外多糖。当样品颜色变为棕黄色时表明存在糖类物质。此外还可以通过碘显色反应观察颜色变化进一步确认。

以上是对该标准中一些关键环节的具体说明，希望对你有所帮助。