DB42T 1589-2020 H7亚型禽流感病毒竞争ELSIA抗体检测方法

DB42/T 1589-2020《H7亚型禽流感病毒竞争ELISA抗体检测方法》是一项湖北省地方标准，为检测H7亚型禽流感病毒抗体提供了标准化的操作流程。以下是对该标准中一些重要条文的详细解读。

标准适用范围

本标准适用于H7亚型禽流感病毒抗体的检测，尤其在禽类养殖、防疫及监测领域具有重要意义。它规定了使用竞争性酶联免疫吸附试验（cELISA）来定量测定血清或血浆样本中的抗体水平。

样品采集与处理

样品应从健康状况良好的禽类中采集，通常采用静脉采血法获取血液样本。样本需立即送往实验室，在4℃条件下保存不超过6小时；若不能及时检测，则应在-20℃下长期保存。样本处理过程中要确保无菌操作，避免污染。

试剂准备

标准要求使用经过验证的抗原和酶标二抗。抗原需来源于H7亚型流感病毒，且经过纯化处理；酶标二抗则需要与检测系统兼容，并通过质量控制测试。所有试剂均需按照说明书要求进行稀释和配制。

检测步骤

1. 包被：将适当浓度的抗原溶液加入到酶标板孔内，每孔100μL，室温静置过夜。

2. 封闭：弃去包被液后，加入封闭液，每孔200μL，37℃孵育1小时。

3. 加样：分别加入待测样品、阳性对照及阴性对照，每孔100μL，37℃孵育1小时。

4. 洗涤：用洗液多次清洗酶标板孔，去除未结合物质。

5. 显色反应：加入底物溶液，避光显色。

6. 终止反应：加入终止液，停止显色反应。

7. 读取结果：使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度值。

结果判断

根据标准曲线计算出样品中抗体的浓度。阳性判定标准为样品的S/CO值大于等于临界值；阴性判定标准为S/CO值小于临界值。S/CO值是样品吸光度与阴性对照吸光度之比再除以阳性对照吸光度所得的结果。

注意事项

1. 实验全程需严格遵守无菌操作规程，防止交叉污染。

2. 所有试剂使用前均需平衡至室温，避免温度差异影响实验结果。

3. 实验数据应妥善记录，包括但不限于日期、操作人员、仪器编号等信息。

4. 定期对设备进行校准和维护，确保检测结果准确可靠。

以上是对DB42/T 1589-2020标准中关键部分的深入解析，希望有助于理解和应用此标准。