DB42T 1582-2020 饲料中牛、羊源性成分定性PCR检测方法

DB42/T 1582-2020是湖北省地方标准，规定了饲料中牛、羊源性成分定性PCR检测的方法。以下是对该标准中重要条文的详细解读：

标准适用于饲料及其原料中牛、羊源性成分的定性检测。其中，样本采集应确保代表性，避免污染。在样品制备过程中，需使用专用设备和耗材，防止交叉污染。

标准指出，DNA提取应采用适合的试剂盒，确保提取效率。对于扩增反应体系的配制，要求精确量取各成分，特别是引物和探针的浓度需符合设计要求。

PCR扩增条件设定为：预变性95℃ 10分钟；循环步骤为95℃ 30秒，60℃ 30秒，72℃ 30秒，共35个循环；最后延伸72℃ 10分钟。此条件旨在保证特异性扩增。

结果判断依据扩增曲线及Ct值，阳性对照Ct值应小于30，阴性对照无扩增。若待测样品出现典型的S型扩增曲线且Ct值小于30，则判定为阳性。

标准强调实验全过程的质量控制，包括空白对照、阳性对照和阴性对照的设置，以及实验室环境的清洁与消毒。这些措施确保检测结果的准确性与可靠性。