DB32T 3802-2020 南美白对虾肝肠胞虫巢式聚合酶链式反应(PCR)检测方法

摘要：本文件规定了南美白对虾肝肠胞虫的巢式聚合酶链式反应（PCR）检测方法，包括样品采集、DNA提取、巢式PCR扩增步骤及结果判定。本文件适用于南美白对虾肝肠胞虫感染的实验室检测与诊断。
Title：Detection method of Enterocytozoon hepatopenaei in Litopenaeus vannamei by nested PCR
中国标准分类号：B46
国际标准分类号：67.120

DB32/T 3802-2020《南美白对虾肝肠胞虫巢式聚合酶链式反应(PCR)检测方法》是一项江苏省地方标准，该标准规定了利用巢式聚合酶链式反应技术检测南美白对虾肝肠胞虫的方法。以下是对标准中一些关键条文的详细解读。

### 范围

标准适用于南美白对虾肝肠胞虫的检测。这一范围明确了该方法的应用领域，确保了检测工作的针对性和准确性。

### 规范性引用文件

标准中引用了多个相关规范性文件，如GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法等。这些引用文件为检测提供了必要的技术支持和参考依据，保证了检测过程的科学性和标准化。

### 术语和定义

标准对“肝肠胞虫”、“巢式聚合酶链式反应”等术语进行了明确界定。例如，“肝肠胞虫”被定义为一种寄生在南美白对虾肝脏和肠道上皮细胞内的微孢子虫。清晰的术语定义有助于避免因理解差异导致的操作失误。

### 样品采集与处理

样品采集应遵循无菌操作原则，并立即置于冰上或冷冻条件下运输至实验室。样本处理过程中需特别注意防止污染，确保提取的DNA质量符合后续实验要求。

### 实验室安全

实验室工作人员必须穿戴适当的个人防护装备，并按照生物安全等级要求开展工作。此外，还应对废弃物进行妥善处理，以保障人员健康及环境安全。

### PCR反应体系建立

标准详细描述了巢式PCR反应所需的试剂成分及其配比，包括引物序列、dNTPs、Mg²⁺浓度等参数设置。正确的体系构建是获得可靠结果的前提条件。

### 扩增程序设定

扩增程序包括预变性、变性、退火以及延伸四个阶段的具体温度与时长安排。合理的程序设定能够提高特异性扩增效率，减少非特异性产物生成。

### 结果判断

阳性对照组出现预期大小的目的条带且阴性对照无非特异性扩增时视为有效测试。对于未知样本，则需结合电泳图谱分析是否存在目标片段来判定是否感染肝肠胞虫。

### 注意事项

操作人员应定期校准仪器设备并验证试剂盒性能；同时还要关注环境因素对实验结果的影响，比如温度波动可能会影响扩增效果。

登陆阅读剩余内容

登陆 注册