TCVMA 157-2024 猪流行性腹泻病毒微滴式数字RT-PCR 检测方法

TCVMA 157-2024《猪流行性腹泻病毒微滴式数字RT-PCR检测方法》相较于旧版标准，在检测灵敏度和特异性上有了显著提升。本文将重点解析其中关于“样品制备”部分的新要求及其应用方法。

在旧版标准中，样品制备主要依赖于传统的RNA提取试剂盒，这虽然能够满足基本需求，但操作步骤繁琐且耗时较长。新版标准引入了磁珠法核酸提取技术，这种技术不仅简化了操作流程，还大幅提高了工作效率和结果准确性。

具体来说，新版标准要求使用专用的磁珠法核酸提取试剂盒来处理待检样本。首先，将采集到的病料（如肠道组织）剪碎后加入裂解液中充分混匀，然后转移至离心管内。接着，按照试剂盒说明书添加适量的结合液并彻底混匀，静置一段时间以确保核酸完全释放。随后，通过磁力架吸附磁珠与核酸复合物，并依次用洗涤液清洗去除杂质。最后，加入洗脱液洗脱得到纯净的RNA样本，即可用于后续的RT-PCR反应。

这种改进后的样品制备方法具有诸多优势：一是减少了人为误差，提升了检测的一致性；二是缩短了整体操作时间，适合大规模筛查工作；三是增强了对低拷贝数目标序列的捕获能力，从而提高了检测下限。因此，在实际操作过程中，实验室应严格按照新版标准的规定执行样品制备步骤，以获得最佳的检测效果。