DB37T 3128.2—2020 Ⅰ群禽腺病毒感染诊断技术　第2部分：血清4型Ⅰ群禽腺病毒感染PCR

DB37/T 3128.2—2020《Ⅰ群禽腺病毒感染诊断技术 第2部分：血清4型Ⅰ群禽腺病毒感染PCR》是一项山东省地方标准，为血清4型Ⅰ群禽腺病毒（FAdV-4）的检测提供了标准化的操作流程和技术要求。以下将对标准中的关键内容进行详细解读。

标准适用范围

本标准适用于血清4型Ⅰ群禽腺病毒引起的鸡和火鸡感染的实验室诊断。明确了该方法主要用于禽类养殖业中疑似病例的确诊工作。

检测原理

基于PCR技术，利用特异性引物扩增目标基因片段。通过对比扩增产物与已知阳性对照品的结果来判断样本是否含有FAdV-4核酸。

样品采集与处理

1. 样品类型：包括病死鸡或火鸡的肝、脾等组织样本以及咽喉拭子。

2. 保存条件：新鲜样本应在-20℃条件下短期保存，长期则需置于-70℃环境中。

3. 处理方式：使用无菌生理盐水制成10%（w/v）悬液后离心取上清备用。

实验材料准备

- 引物设计应确保其特异性强且灵敏度高。

- 阳性对照品需来源于已确认携带FAdV-4病毒的动物样本，并经过严格验证。

PCR反应体系及程序

- 反应体系包括模板DNA、上下游引物、dNTPs、Taq酶等成分。

- 扩增程序通常包括预变性95°C 5分钟；随后进行30轮循环（94°C 30秒，55°C 30秒，72°C 1分钟），最后延伸阶段72°C 10分钟。

结果分析

1. 如果扩增出预期大小的目标片段，则判定为阳性；

2. 若无明显扩增条带出现，则视为阴性；

3. 对于模糊结果需要重复实验或采用其他方法进一步确认。

注意事项

- 实验全程必须严格遵守无菌操作规程以防止污染。

- 定期校准仪器设备保证检测准确性。

- 使用过的废弃物按照相关规定妥善处置。

以上是对DB37/T 3128.2—2020中关于血清4型Ⅰ群禽腺病毒感染PCR检测部分内容的重点解读。这项标准对于提高禽腺病毒检测效率具有重要意义，在实际应用过程中还需结合具体情况灵活调整。